中药余甘子抗HBV活性成分研究

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种严重危害人类健康的疾病，但迄今仍没有特效治疗药物。中药治疗乙型肝炎是我国特有的和有效的一种治疗手段，许多中药制剂已被用作对乙型肝炎的治疗或辅助治疗，因此从中草药中寻找抗HBV有效成分是发现并研制抗HBV药物的一条有效途径。 中药余甘子phyllanthus emblica L．系大戟科（Euphorbiaceae）叶下珠属（Phyllanthus）植物余甘子的干燥果实；味甘、酸、涩，性凉；具有化痰止咳、健胃消食、清热生津、保肝解毒等功效。现代药理学研究表明余甘子提取物对肝损伤具有保护作用，对四氯化碳所致小鼠肝损伤性纤维化有明显的治疗作用。临床上余甘冲剂等用于治疗乙型肝炎，但是余甘子抗乙型肝炎的物质基础尚未明确。为了寻找该植物抗HBV的有效成分，本课题选用HepG2 2.2.15细胞为筛选模型，以上清液中HBsAg、HBeAg的分泌变化为评价指标，对余甘子抗HBV活性成分进行系统的追踪分离纯化，依次得到余甘子乙醇提取物→乙酸乙酯萃取部分→硅胶柱层析分离组分C、D、E→硅胶和Sephadex LH-20等柱层析分离纯化所得化合物Ⅰ～Ⅹ。 经MS、1H NMR、13C NMR以及2D NMR等波谱鉴定，确定了9个单体化合物（Ⅰ～Ⅸ）和1个含有同分异构体的混合物（Ⅹ），分别是β-香树脂酮（Ⅰ）、没食子酸（Ⅱ）、β-胡萝卜苷（Ⅲ）、β-谷甾醇（Ⅳ）、粘酸-1-甲酯-6-乙酯（Ⅴ）、粘酸二甲酯-2-O-没食子酸（Ⅵ）、鞣花酸（Ⅶ）、Elaeocarpusin（Ⅷ）、1，6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖（Ⅸ）、双没食子酸（Ⅹ）。其中，化合物Ⅴ为首次从该植物中分离得到，化合物Ⅰ为首次从该属植物中分离得到。 对分离得到的化合物进行初步的活性评价，发现4个化合物（Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ）具有抗HBV活性，其中化合物Ⅷ和Ⅹ有显著的抗HBV作用，对2.2.15细胞HBeAg、HBsAg的分泌均有抑制作用，IC50分别为10.2、70.9μg／ml和5.5、101.0μg／ml；化合物Ⅸ对HBeAg的分泌有显著的抑制作用，IC50为13.2μg／ml；化合物Ⅱ对HBsAg的分泌有一定的抑制作用，IC50为83.9μg／ml。化合物Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ的抗HBV活性为首次发现，进一步深入的研究，有望成为抗HBV苗头药物或先导化合物。