四君子汤总多糖通过肠道菌群改善脾虚小鼠免疫功能的研究

目的 四君子汤经过反复的临床验证,成为治疗脾胃气虚的经典方。运用现代医学方法对其进行物质基础的研究发现,四君子汤中含量最多及主要的有效成分之一为多糖。四君子汤多糖可以通过激活肠道粘膜局部免疫从而影响系统免疫,然而,由于受多糖本身不易被机体吸收等限制,其作用机制始终未能明确。而人体肠道中存在的微生物群落可利用多糖适应性改变其结构和功能,参与维持人体的正常生理状态。故本研究的主要目的是采用不同的方法复制脾虚模型,筛选出适合本研究的造模方法,并观察四君子汤总多糖对脾虚小鼠免疫功能及肠道菌群的影响,探讨四君子汤总多糖是否通过调节肠道菌群改善脾虚小鼠免疫功能。 方法 1.采用硫酸-苯酚法测定四君子汤总多糖含量； 2.采用苦寒泻下(灌胃番泻叶水煎液)、复合因素法(灌胃番泻叶水煎液加饥饱失常及灌胃番泻叶加抗生素)建立脾虚模型,记录小鼠派氏结个数、称量胸腺重量并计算胸腺指数、流式细胞仪检测外周血白细胞数量、MTT法检测脾脏及肠系膜淋巴结T淋巴细胞转化增殖能力,比较不同方法造模小鼠上述免疫指标的变化,从而确定一种适于本研究的造模方法； 3.采用传统菌落计数法及荧光定量PCR法检测脾虚小鼠肠道菌群的变化,以观察脾虚时肠道菌群是否发生紊乱； 4.脾虚小鼠经四君子汤总多糖干预后,用血细胞分析仪检测小鼠外周血白细胞比例、’流式细胞术检测肠系膜淋巴结中T、B淋巴细胞比例、ELISA法检测肠道sIgA含量、MTT法检测肠系膜淋巴结及脾脏淋巴细胞增殖能力,并观察胸腺指数及派氏结个数等免疫功能的变化以及肠道双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌及脆弱拟杆菌数量的变化,观察四君子汤总多糖对脾虚小鼠免疫功能及肠道菌群的影响； 5.采用菌落计数法观察四君子汤总多糖对肠道双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌及脆弱拟杆菌体外培养的影响。 结果 1.四君子汤总多糖的含量为72.5%。 2.以上三种造模方法均能使小鼠出现不同程度的脾虚状态,其中复合因素(番泻叶加饥饱失常)造模小鼠胸腺指数、派氏结个数、脾脏及肠系膜淋巴结淋巴细胞转化增殖能力均显著下降(P<0.05),且自然恢复最缓。 3.两种方法检测脾虚小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、脆弱拟杆菌数量与正常鼠相比均上升,且菌落计数法计算所得B/E值下降。 4.经四君子汤总多糖干预后,小鼠脾虚状态有所恢复,胸腺指数、派氏结个数以及肠道sIgA含量均上升(P<0.05),淋巴细胞增殖能力提高(P<0.05),外周血白细胞比例及肠系膜淋巴结中T、B淋巴细胞比例恢复接近正常,肠道菌群的数量均有一定的下降,接近正常水平。 5.四君子汤总多糖对肠道菌群具有促进其生长的作用,且对益生菌的促进作用较为明显。 结论 番泻叶加饥饱失常法造模最适合本研究,且四君子汤总多糖对脾虚造成的肠道菌群失调和免疫功能抑制具有一定的调节作用。