基于大鼠肝郁证模型优化和疏肝解郁功效的柴胡效—毒关联评价

目的:以中医肝郁证病因病机为指导,临床表现为背景,对现有大鼠肝郁证模型进行方法优化,建立适宜于中药效-毒关联评价的大鼠肝郁证模型,并用于柴胡疏肝解郁的功效及伴随毒副作用评价研究,为中药效-毒关联评价提供技术支撑,为评价柴胡的有效性和临床用药安全性提供实验依据。方法:通过大鼠肝郁证模型方法学研究,建立适宜于中药效-毒关联评价的大鼠肝郁证模型;结合中医证候赋分并通过检测下丘脑促肾上腺皮质激素(CRH)、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)指标变化来观察柴胡水提物、醇提物及皂苷a对肝郁证大鼠的防治作用,计算各组大鼠肝脏、脾脏、胸腺的脏体比值,并检测各组大鼠血清中AST、ALT、BUN、CR的含量,明晰柴胡不同样品对肝郁证模型大鼠的药效及伴随毒副作用。结果:经过大鼠肝郁证模型的筛选,夹尾4次·d-1、带枷5h·d-1、双后肢立式束缚的复合造模法成模效果明显优于其他造模法,主要表现为:严重脱毛,急性应激躁狂和慢性应激抑郁,粪便发干、形小,数量明显减少,眼周重度淤血,尾部重度瘀斑,大鼠体重增长率低于空白组,下丘脑CRH、血浆CORT、ACTH水平与正常对照组相比有显著性的升高,阳性药物组经过药物治疗后其症状明显好转,各指标也趋近于正常组水平;柴胡水提、醇提、SSa各组与柴胡疏肝散组相对于模型组体重增长较快,观察大鼠状态有所改善,证候积分降低,0.9～3.6g·kg-1的柴胡水提物、0.9～3.6 g·kg-1的柴胡醇提物、18.1～72.4 mg·kg-1的柴胡皂苷a对肝郁证大鼠的肝郁证候有显著的改善作用;3.6g·kg-1的柴胡水提物、1.8～3.6g·kg-1的柴胡醇提物、18.1～72.4mg·kg-1的柴胡皂苷a可明显降低肝郁大鼠CRH、ACTH和CORT两者的含量;检测ALT、AST、BUN、Cr的肝、肾功能指标,发现在肝郁证候背景下,3.6g·kg-1的柴胡水提物未发现明显的肝、肾毒副作用,1.8～3.6 g·kg-1的柴胡醇提物、18.1～72.4 mg·kg-1的柴胡皂苷a对肝脏有较小的毒副作用,未发现明显的肾脏毒副作用。结论:使用夹尾、四肢捆绑和颈部带枷复合情志造模法构建肝郁证大鼠模型周期短、稳定性好、成功率高,模型动物表现与临床肝郁证证候有较高的一致性;实验研究显示柴胡对肝郁证大鼠的行为具有显著的改善作用;可明显降低肝郁大鼠CRH、ACTH、和CORT三者的含量,对HPA轴有抑制作用,提示柴胡具有抗肝郁、条达肝气、疏肝解郁的作用,其机制可能与其调节肝郁模型大鼠血液中ACTH和CORT的水平有关。其中,仅中、高剂量的柴胡醇提物与柴胡皂苷a对肝郁证大鼠模型肝脏有较小的毒副作用,说明柴胡不同样品在证候背景下有效剂量范围内的肝、肾毒副作用降低,提示有毒中药作用于证候本身与作用于正常机体状态是不一样的,揭示合理辩证是保障柴胡合理、安全用药的重要因素之一,对于探讨柴胡肝毒性与功效和证候的相关性,为探讨基于中药功效和证候背景的临床合理用药的科学内涵提供了重要依据。