微囊蛋白在小鼠胆囊胆固醇结石症形成中的作用

目的：研究微囊蛋白在致石饲料诱导的小鼠胆囊胆固醇结石症形成中的作用,为临床胆囊胆固醇结石症的诊疗提供新的思路。 方法：以结石易感小鼠C57BL/6小鼠为研究对象,分别给予普通饲料和含高脂高胆固醇致石饲料饲养4周。4%水合氯醛腹腔注射,待小鼠麻醉后,进行小鼠外科实验。依次剪开皮肤、皮下筋膜、腹膜,充分暴露肝胆组织,肉眼观察小鼠肝脏、胆囊外观及胆囊结石形成情况。结扎胆囊管及胆总管下端,在胆总管插入PE10号管1h留取胆汁-20℃保存。下腔静脉采血于含EDTA的生化管中,3000rpm4℃离心15min收集上层血清4℃保存。最后切取肝脏和胆囊组织,肝脏称重,肝胆组织保存于-80℃冰箱。全自动生化分析仪检测血脂及胆汁成分。RT-PCR及Westren blot分别检测小鼠肝脏及胆囊CAV1、CAV3、SR-B1、CCK-AR的基因和蛋白水平。 结果：致石饲料饲养4周后,实验组小鼠胆囊增大,胆囊内可见大量泥沙状胆固醇结石沉积,成石率为100%(6/6),而普通饲料饲养的对照组小鼠胆囊略小,均未发现有结石。实验组小鼠肝体重比显著增加(0.08±0.01vs0.05+0.01,P<0.01),肝脏外观较灰暗、肿大,而普通饲料饮食的对照组小鼠肝脏色泽红润,体积较小实验组小鼠胆汁浑浊,胆固醇和磷脂含量较对照组明显升高(1.33±0.33vs0.21±0.11,P<0.01；3.55±1.40vs1.55±0.63,P<0.05),而总胆汁酸含量却显著下降(726.48±51.83vs839.83+23.75,P<0.01)。实验组小鼠血清总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量明显高于对照组(TC：4.22±0.46vs2.21±0.11,P<0.01；HDL：1.86±0.10vs1.35±0.11,P<0.01,LDL：2.18±0.44vs0.58±0.12,P<0.01),甘油三酯、极低密度脂蛋白(水平未有明显改变(TG：0.75+0.04vs0.83+0.15,VLDL：0.18±0.12vs0.28±0.09)。与对照组小鼠相比,实验组小鼠肝脏和胆囊CAV1mRNA和蛋白表达均显著下降(肝脏CAV1基因和蛋白分别为0.53±±0.13vs1±±0.32,P<0.01；0.39±0.07vs0.9±0.06,P<0.01；胆囊CAV1基因和蛋白分别为0.44-0.22vs1±0.22,P<0.01；1.04±0.07vs1.34±0.04,P<0.01),胆囊CCKAR基因和蛋白水平亦明显降低(0.32±0.20vs1±0.25,P<0.01；0.07±0.02vs0.35±0.04,P<0.01),两组小鼠肝脏均未能检测到CCK-AR的表达。肝脏CAV3mRNA和蛋白表达增加(肝脏CAV3基因和蛋白分别为3.38±1.47vs1±0.17,P<0.01；0.93±0.04vs0.5±±0.06,P<0.01),胆囊CAV3mRNA水平改变没有统计学意义(0.87±0.27vs1±0.40),蛋白水平显著升高(0.25±0.03vs0.17±0.02,P<0.05)；SR-B1基因和蛋白均未有明显改变(肝脏基因和蛋白分别为0.25±0.03vs0.17±0.02,0.9±0.04vs0.92±0.04；胆囊基因和蛋白分别为0.86±0.27vs1±0.35,0.89±0.03vs1.044±0.07)。 结论：含高脂高胆固醇高胆酸的致石餐作为一外界干预因素,能诱导小鼠血脂含量升高,胆道胆固醇高分泌,总胆汁酸合成减少,促使小鼠胆囊胆固醇结石形成。小鼠胆囊胆固醇结石产生伴随CAV1和CAV3在肝胆组织基因和蛋白表达水平发生变化,提示CAV1及CAV3可能与胆囊胆固醇结石的形成有关。SR-B1可能对C57BL/6小鼠胆囊胆固醇结石的形成无显著影响。CAV1在肝胆组织表达下降,可能造成胆固醇转运功能受损,脂质代谢紊乱,胆固醇在肝细胞内大量堆积。CAV3可能通过抑制胆囊CCKAR的表达,减弱胆囊平滑肌的收缩,胆囊动力低下,胆汁淤滞,促进胆固醇结晶析出,聚集以及结石形成。CAV1、CAV3有望成为临床胆囊胆固醇结石症治疗的药物靶标分子或/和诊断标志物。