乳香炮制前后化学成分变化及质量标准研究

目的：本课题围绕乳香炮制前后化学成分变化和乳香醋炙品炮制工艺及乳香饮片质量标准进行规范化研究。研究使用的乳香药材来源是埃塞俄比亚乳香,为橄榄科植物卡氏乳香树(Boswellia carterii Birdw)及其同属植物皮部渗出的或经刀割渗出的树脂。本实验主要是通过比较研究乳香炮制前后总成分和单一成分变化,确定乳香炮制前后化学成分的改变,探讨乳香的炮制原理；根据不同炮制工艺对其化学成分的影响,筛选出醋炙工艺；初步建立乳香饮片质量标准；建立乳香饮片HPLC指纹图谱,并对炮制前后的变化进行对比研究；为临床正确使用乳香提供依据,从而提高和保证饮片质量,保证临床用药安全有效。 方法：采用高效液相法,确定乳香中11-羰基-p-乙酰乳香酸的测定方法,测定乳香生品、清炒品及醋炙品中11-羰基-p-乙酰乳香酸的含量；采用紫外分光光度法,以NaOHPH值,萃取溶剂,萃取次数为因素,选取不同水平,以三萜类有机酸为指标,用单因素试验方法筛选出提取条件,测定乳香生品、清炒品及醋炙品中三萜类有机酸的含量；采用气相色谱法,确定乳香挥发油中乙酸辛酯的测定方法,测定乳香生品、清炒品及醋炙品挥发油中乙酸辛酯的含量,比较不同炮制方法对乳香中总成分与单一成分含量的影响；采用正交试验法,以加热温度、加热时间、醋用量和加醋后加热时间为炮制的主要影响因素,选取不同水平,以11-羰基-β-乙酰乳香酸为指标,优选出乳香醋炙炮制工艺；收集乳香药材样品十批次,按照净制法和优选的醋炙工艺炮制乳香,按照“中药质量标准制定指导原则”,分别对乳香饮片的名称、炮制方法、性状、鉴别、检查、含量测定等项进行研究,总结资料,初步建立生乳香、醋炙乳香饮片质量标准及起草说明；采用HPLC法建立生乳香及醋炙乳香饮片的高效液相指纹图谱,比较乳香生品、清炒品及醋炙品指纹图谱出峰位置、数量及峰面积上的区别。 结果：对乳香生品、清炒品和醋炙品进行了比较研究,结果表明不同炮制方法对乳香中11-羰基-p-乙酰乳香酸、三萜类有机酸和乙酸辛酯的含量有一定影响,乳香不同炮制品11-羰基-p-乙酰乳香酸含量比较结果为：醋炙品3.96%>清炒品3.82%>生品3.68%；三萜类有机酸含量比较结果为醋炙品7.77%>生品6.07%>清炒品5.88%；乙酸辛酯含量比较结果为：醋炙品42.35%>清炒品37.04%>生品27.87%。通过正交试验优选乳香醋炙工艺为180℃加热5min后加醋5%,再加热4min。对炮制后的十批乳香生品及十批醋炙品进行性状、鉴别、水分、灰分、挥发油、水溶性浸出物和醇溶性浸出物检查,HPLC法测定11-羰基-p-乙酰乳香酸含量,规定乳香生品含11-羰基-β-乙酰乳香酸不得少于3.6%,乳香醋炙品不得少于3.9%。建立生乳香及醋炙乳香高效液相指纹图谱,通过指纹图谱处理软件Chromap1.5对其指纹图谱进行相似度分析,得出十批生乳香饮片指纹图谱相似度不低于0.85,十批醋炙乳香饮片指纹图谱相似度不低于0.85；比较乳香生品、清炒品和醋炙品饮片指纹图谱,发现炮制后指纹图谱差别不大。 结论：对乳香生品、清炒品及醋炙品进行了比较研究,结果表明炮制对乳香中11-羰基-p-乙酰乳香酸、三萜类有机酸和乙酸辛酯的含量有一定影响。通过正交试验优选了乳香醋炙工艺,通过实验证明该工艺可行,炮制的饮片质量稳定。建立了生乳香、醋炙乳香饮片质量标准(草案),可以用来控制其饮片质量。建立了生乳香及醋炙乳香饮片高效液相指纹图谱,并对乳香生品、清炒品及醋炙品指纹图谱进行了比较研究,炮制后指纹图谱几乎无差别。