目的:中药玉叶金花,又名山甘草,为茜草科(Rubiaceae)玉叶金花属(Mussaenda L.),玉叶金花(Mussaenda pubescens Ait.f.)的干燥茎叶。据研究显示玉叶金花(Mussaenda pubescens Ait.f)中含豆甾醇,环烯萜类,三萜类等化学成分。玉叶金花性凉,味甘、淡,归膀胱、肺及大肠经,为解表药、利湿药。具有清热利湿、解表消肿、清凉消暑、活血化瘀等功效,可用于治疗感冒、发热、湿热小便不利、毒蛇咬伤、治肠胃疾病及预防流感等。玉叶金花在近些年因抗炎抗抗流感功效明显而被广泛研究,实验证实玉叶金花水提物具有抗炎抗病毒的功效,其含有的成分玉叶金花苷酸甲酯(mussaenoside)是环烯醚萜苷,具有明显的抗炎、镇痛及抗菌作用。本实验室前期实验证明玉叶金花水煎液对小鼠流感模型血清中的IL-6、TNF-α等具有下调作用。流感病毒(Influenza Virus,Ⅳ)属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)流感病毒属(Influenzavirus),甲型流感病毒根据囊膜上的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)结构和基因特性的不同,可以分为16个HA亚型和9个NA亚型。甲型流感病毒是一种多形性的囊膜病毒,呈球形,病毒颗粒结构可分为囊膜,质蛋白和核壳体三层,外层囊膜由一个含有三种跨膜蛋白(HA、NA、M2)的脂质双分子层构成。其中,HA是含量最丰富的囊膜蛋白,占80%,病毒吸附和膜融合中发挥着重要的作用。当流感病毒入侵机体时,机体在产生致炎细胞因子以消灭病原微生物的同时,为了防止炎症过度反映,机体便产生内源性的抗炎细胞因子。其中促炎性细胞因子主要包括IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α等。基于以上研究,本课题主要对玉叶金花的化学成分进行研究,并对其体外抗流感病毒抗炎的活性进行探讨。方法:采用硅胶、sephadex LH-20、ODS柱色谱等方法分离纯化化合物,通过核磁共振技术以及文献比对鉴定其结构,从玉叶金花中分离并鉴定出6种单体化合物,其中五个化合物通过甲型流感病毒鼠肺适应株A/FM1/47(H1N1)感染的MDCK体外流感模型进行抗病毒活性检测,并通过CPE法和MTT法评价结果;采用qPCR法检测病毒HA基因水平的相对含量,来评价化合物是否对病毒HA基因表达有调节作用。在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞THP-1的炎症模型,进行抗炎活性评价。本实验采用CCK-8法测定THP-1细胞活性及各单体化合物的TC50;荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real time-PCR)法测定炎症因子 TNF-α,IL-12,IL-8,IL-23.IL-22,IL-1β 的 mRNA 表达水平。结果:从玉叶金花中分离并鉴定了 6个化学成分,分别为:咖啡酸甲酯(1)、豆甾醇(2)、mussaendoside R(3)、mussaendoside Q(4)、mussaendoside G(5)、mussaendoside U(6)。选择其中化合物1、3、4、5和6在LPS诱导的巨噬细胞THP-1上进行抗炎活性研究结果显示,在体外实验中均可对细胞因子IL-1β、IL-23、TNF-α、IL-12、IL-22、IL-8的mRNA相对含量有一定调节能力,其中,化合物1和3的调节作用显著。化合物1,3和4具有体外抗病毒活性,且对病毒HAmRNA的相对含量有下调作用。结论:化合物1是首次从该植物中发现。化合物1,3和4具有体外抗流感病毒活性,其机理与它可以下调病毒HA mRNA相对表达水平有相关性。在LPS诱导下巨噬细胞THP-1体外炎症细胞模型上证明了玉叶金花单体化合物对流感相关炎症细胞因子有调节作用,具有体外抗炎活性。
