山羊传染性胸膜肺炎病原分离及诊断方法研究

目的 改进山羊支原体培养基的营养成分和培养条件，解决山羊支原体培养时间长、营养要求高和难于分离的问题；鉴定重庆地区山羊传染性胸膜肺炎病原流行株的血清型，并针对这种血清型筛选出敏感药物，用于临床治疗；建立临床上简便、快速、特异、灵敏的检测方法，为该病快速诊断和流行病学调查提供帮助。 方法 结合本实验室的具体情况，参照支原体的营养需要和分离培养生长条件，对Hartleys培养基进行适当的改良；支原体的分离鉴定按照Fredndt等介绍的经典方法进行；药敏试验按照戴自英的药物纸片琼脂扩散法进行；玻板凝集试验按照彭远义的方法进行；酶联免疫吸附试验（ELISA）按吴延功的方法进行；微量间接血凝试验（MIHA）参照杨宜生等的方法进行；PCR试验参照Marie-Pierre Monnerati等的方法进行；对5个发病羊场的51份可疑血清，用玻板凝集、ELISA和MIHA法检测，分别检验其阳性检出率和与有典型临床症状阳性病例的符合率。 结果 山羊支原体标准菌株和分离株，在改良型Hartleys液体培养基上，经24～72h后，培养基颜色由红色变成黄色，培养基显著浑浊，颜色变化单位（CCU）达10-13及其以上；经鉴定，本次分离到的山羊传染性胸膜肺炎病原的血清型为丝状支原体山羊亚种PG3株；玻板凝集试验所制诊断抗原经严格检验，无自凝现象，对可疑病例的阳性检出率为56.86％，检测结果与具有典型临床症状病例的符合率为38.10％：25种抗生素体外抑菌试验表明：病原对环丙沙星、壮观霉素等6种药物高度敏感，对奥复星、头孢拉定等5种药物中度敏感，对复方新诺明、庆大霉素等14种药物不敏感；在MIHA试验中，用致敏豚鼠红细胞代替绵羊红细胞，对由丝状支原体山羊亚种PG3株引起的山羊传染性胸膜肺炎病进行诊断，阳性检出率为21.57％，检测结果与具有典型临床症状病例的符合率为72.73％；酶联免疫试验的抗原最佳包被浓度为4.0mg/l，血清最佳稀释倍数为1：40，最适包被时间为4℃过夜，封闭时间以37℃、2h效果最好，酶标二抗以工作2h最理想，底物反应时间以20min为宜，该法对可疑病例的阳性检出率为19.61％，检测结果与具有典型临床症状病例的符合率为80％；用Marie-PierreMonnerati等设计的一对引