不同证型原发性肝癌患者GGT、AMY糖链变化及机理研究

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率有上升的趋势。历代的中医文献可以见到类似肝癌的症状体征的记载，如“积”、“癥”、“瘤”、“伏梁”等。中医认为脏腑气血虚亏，加之七情内伤，情志抑郁；脾虚湿聚，痰湿凝结；六淫邪毒入侵，邪凝毒结等可使气、血、湿、热、瘀、毒互结而成肝癌。由于目前研究人员对于肝癌辨治的认识不尽相同，故迄今仍未建立起统一的肝癌的基本证型与治疗法则。近年来，证候量化诊断标准研究已经成为中医证型研究的一大趋势，这对临床辨证施治提供理论依据，提高肝癌临床疗效尤为重要。 目的：研究不同证型原发性肝癌患者GGT、AMY糖链变化及机理，从分子水平阐明证型相关GGT、AMY糖链和活性变化的机理，揭示肝癌的中医病机传变的分子机制。方法：1．分别检测正常人（30例）、肝炎病患者（20例）、肝硬化患者（15例）及原发性肝癌患者（31例）血清中AFP含量，GGT、AMY活性；2．分别用用刀豆素A（ConA）、小扁豆凝集素（LCA）、植物白细胞凝集素（L-PHA）、花生凝集素（PNA）、豌豆凝集素（PSA）、麦胚凝集素（WGA）处理正常人、肝炎病患者、肝硬化患者及原发性肝癌患者血清后测定其GGT、AMY活性，分析各组人群血清GGT、AMY的各凝集素结合率；同时检测各组人群血清中ONOO-和MDA含量；3.31例原发性肝癌患者分为气滞血瘀组、肝郁脾虚组和肝肾阴虚组，分析GGT、AMY的各凝集素结合率及自由基的差异；4．分析GGT、AMY的各凝集素结合率与自由基的相关性。 结果：1．肝癌组血清AFP含量、AMY活性的均值虽明显高于其他组，但经统计分析各组间无显著性差异（P＞0.05）。而肝癌组血清GGT活性明显高于肝硬化组、肝炎组及正常组（P＜0.05）。2．肝癌组血清GGT的L-PHA、WGA结合率明显高于肝硬化组、肝炎组及正常组（P＜0.05）；肝癌组及肝硬化组GGT的LCA、PSA结合率明显高于肝炎组及正常组，差异有显著性（P＜0.05）；肝癌组AMY的ConA、LCA、L-PHA、PNA、PSA的结合率明显高于肝炎组及正常组，差异有显著性（P＜0.05），而与肝硬化组无显著性差异（P＞0.05）。3．肝癌患者与肝硬化患者血清中MDA水平显著高于肝炎患者及正常人，差异有显著性（P＜0.05），各组血清ONOO-无显著性差异。4．不同中医证型原发性肝癌各组间AFP含量，GGT、AMY活性、ONOO-、MDA无显著性差异（P＞0.05）。肝郁脾虚组血清GGT的LCA、PNA、PSA、WGA结合率明显高于肝肾阴虚组（P＜0.05）；肝郁脾虚组血清AMY的LCA、PSA的结合率明显高于肝肾阴虚组（P＜0.05）。血清GGT的L-PHA、PSA、WGA结合率与MDA水平呈显著正相关，血清AMY的LCA、PNA、PSA结合率与MDA水平呈显著正相关。 结论：本研究通过实验发现，随着病情进展，肝脏病患者血清中的GGT、AMY糖链结构会发生显著变化，肝癌患者GGT分子中带三、四天线复杂型糖链明显增高，带多天线糖链结构的GGT对肝癌的发生演变有促进作用，肝癌患者GGT分子中核心岩藻糖基化的高甘露糖型、杂合型糖链亦增多；而AMY分子中，除三、四天线复杂型糖链明显增加外，核心岩藻糖基化的高甘露糖型、杂合型糖链遂步增多，其糖链末端唾液酸基、岩藻糖基丢失可能遂步增多，D-半乳糖的暴露遂步增多；而这可能与肝癌患者血清自由基水平的增高有关。本研究还发现，肝癌不同证型间在GGT、AMY糖链结构存在一定的差异，肝郁脾虚组GGT分子中核心岩藻糖基化的高甘露糖型、杂合型糖链增多。此外，肝癌患者有肝郁脾虚时，其血清AMY分子中核心岩藻糖基化的高甘露糖型、杂合型糖链亦增多。表明了证型相关的特异的糖链变化。