茯苓调节免疫功能活性物质及指纹图谱研究

茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.Wolf)的干燥菌核,收载于2005版中国药典。《神农本草经》将茯苓列为上品,具有渗湿利水、健脾宁心之功效。现代药理学研究表明,茯苓具有调节免疫功能、抑制肿瘤、抗炎等药理作用。 本论文以调节免疫功能作为药理指标,对茯苓调节免疫功能活性物质进行了研究。采用溶剂法和化学法,将茯苓分为茯苓乙醇总提物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水溶性物质、茯苓多糖的降解产物及其羧甲基化衍生物等6个部位,对以上部位进行了调节免疫功能生物活性筛选,确定了茯苓多糖降解产物、羧甲基化衍生物和茯苓乙酸乙酯提取物为主要有效部位。 采用正交设计优选法对茯苓多糖的提取工艺进行了研究,获得了可靠的技术参数;采取Smith降解法,获得降解多糖;采用二次碱化法制备羧甲基茯苓多糖,考察了反应状态、反应介质、反应时间、反应温度、物料比等影响化学合成反应的重要因素,最终得到水溶性明显改善的羧甲基茯苓多糖,采用酸碱滴定法测定取代度(D.S),D.S可达到0.8。 采用溶剂法和色谱法,从茯苓主要有效部位乙酸乙酯提取物中分离得到6个单体成分,鉴定了其中5个化合物,分别为麦角甾醇(ergosterin,Ⅰ)、茯苓酸(poria acid,Ⅱ)、齐墩果酸(oleanolic acid,Ⅲ)、去氢依布里酸(dehydroeburic acid,Ⅳ)、3β-羟基羊毛甾烷-7,9(11),24-三烯-21-酸(3β-hydroxy-lanostane-7,9(11),24-triene-21-acid,Ⅴ),从而为进一步研究茯苓药效物质基础研究奠定了一定基础。 采用高效液相色谱法,制定了茯苓主要有效部位乙酸乙酯提取物的指纹图谱,通过对不同产地茯苓样品的图谱进行比较,标定了10个共有峰,共有峰在90min内完全分离。指纹图谱各项技术参数均符合国家药品食品监督管理局颁布的《中药注射剂指纹图谱技术要求(暂行)》相关要求,方法重现性和稳定性良好,从而为评价茯苓内在品质提供了科学依据,并为制定茯苓提取物与国际接轨的质量评价方法提供了参考依据。