吡格列酮治疗大鼠非酒精性脂肪肝病及机制研究

目的:通过高脂饮食构建大鼠非酒精性脂肪肝病（NAFLD）模型;探讨胰岛素抵抗（IR）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）、脂肪代谢、炎症反应在NAFLD发病机制中的作用;观察吡格列酮（PIO）治疗大鼠NAFLD的疗效及对肝脏JNK1表达的影响;探讨PIO治疗NAFLD的作用机制。 方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常饮食组16只,予以普通饲料喂养;高脂饮食组24只,予以高脂饲料（普通饲料加1%胆固醇和14%猪油）喂养;第8周末两组随机处死8只大鼠鉴定成模,分别为8周正常对照组（NG8w）和8周高脂模型组（HG8w）。第9周开始将高脂饮食组大鼠随机分为2组:12周高脂模型组（HG12w）8只,均予以生理盐水2ml·d-1灌胃4周;吡格列酮组（PG）10只,均予以盐酸吡格列酮片10mg·kg-1d-1灌胃4周。两组均继续给予高脂饲料喂养4周。每只大鼠处死前隔夜禁食并称重;经门静脉取血,离心分离血清,用于测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、空腹血糖（FBS）、血清胰岛素（FIns）、游离脂肪酸（FFAs）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）;计算空腹胰岛素抵抗指数（FIRI）;游离肝脏并称重,计算肝指数;取小块肝组织剪碎,倒入玻璃匀浆器中匀浆,制成10%的肝组织匀浆,用于测定肝匀浆FFAs、TG、TC含量;取大鼠肝右叶组织病理切片,HE染色,评价肝脏脂肪变性程度。取大鼠肝右叶组织石蜡切片,用免疫组织化学方法检测JNK1在肝组织中的表达。 结果:（1）与同期正常对照组相比,HG8w和HG12w SD大鼠体重、肝指数、血清ALT、AST、TG、TC、FIns、FIRI、FFAs、TNF-α水平及肝匀浆TG、TC、FFAs均明显升高,比较有统计学意义（均p＜0.05）;而血糖没有明显变化（p＞0.05）;光镜下,HG8w大鼠肝脏出现空泡样脂肪变性,HG12w大鼠肝脏空泡样脂肪变性呈弥漫性,伴有炎症细胞浸润甚至点状坏死;（2）PG组大鼠的肝指数、血清ALT、AST、TG、FIns、FIRI、FFAs、TNF-α水平及肝匀浆TG、FFAs均低于HG12w组,但仍高于NG12W,比较均有统计学差异（均P＜0.05）;PG组大鼠肝脏HE染色肝组织切片,光镜下观察肝小叶内可见肝细胞呈大泡性脂肪变性及气球样变,脂肪变性程度较HG12w减轻,偶见炎症细胞浸润无点状坏死;（3）JNK1蛋白免疫组织化学显示:光镜下观察,NG组大鼠肝组织未见明显JNK1抗体阳性细胞;HG8w、HG12w大鼠肝脏则有较强的JNK1表达,表现为细胞浆和/或细胞核内弥漫性棕黄色或棕褐色颗粒。免疫组化评分与NG组大鼠相比均有统计学意义（均P＜0.01）;PG大鼠的肝脏JNK1表达较HG12W弱,表现为阳性颗粒的着色程度及阳性细胞数均较少,但较NG12W表达仍高,比较均有统计学意义（均p＜0.01）;（4）FIRI分别与肝脏脂肪变性及TNF-α、FFAs、JNK1表达水平之间均呈正相关;TNF-α、FFAs与JNK1表达水平之间均呈正相关。 结论: 1.SD大鼠持续高脂饮食喂养8周成功构建了NAFLD模型。 2.PIO能改善IR、减轻炎症反应,对SD大鼠NAFLD有治疗作用。 3.PIO可能通过降低TNF-α、FFAs部分抑制JNK1表达从而改善IR。