目的：
运用MicroPET/CT研究柴胡疏肝散对肝气郁结证模型大鼠脑局部葡萄糖代谢及多巴胺2型受体(D2R)亲合力的影响,并从行为学、神经内分泌、免疫、单胺类神经递质等方面探讨柴胡疏肝散治疗肝郁证的作用机理,重点阐释柴胡疏肝散治疗肝气郁结证的中枢作用机制,为柴胡疏肝散(疏肝解郁法)治疗肝郁证提供理论依据及客观可视性依据。
方法：
1肝气郁结证大鼠模型的建立及评价：通过开野实验(Open-field test, OFT)将评分相近的30只大鼠随机分为空白对照组(对照组)10只,肝气郁结证模型组(模型组)10只,柴胡疏肝散组(治疗组)10只。运用慢性束缚应激结合孤养法建立肝气郁结证大鼠模型,共3周,观察一般外部表征及体重；行为学变化；ELISA法测定血浆ACTH、CORT、IL-6和NF-α; HPLC法测定前额叶皮质、海马及下丘脑中单胺类神经递质的含量。
2柴胡疏肝散对肝气郁结证模型大鼠脑局部葡萄糖代谢干预机制的MicroPET/CT研究：通过OFT将评分相近的60只大鼠随机分为空白对照组(对照组)10只,肝气郁结证模型组(模型组)10只,自然恢复1周组(恢复组)10只,四君子汤组(四君组)10只,柴胡疏肝散低剂量组(低剂量组)10只,柴胡疏肝散高剂量组(高剂量组)10只。对照组：群养,5只/笼,不做任何刺激,生理盐水灌胃,每日1次；模型组：细钢丝网笼束缚结合孤养,生理盐水灌胃,每日1次；恢复组：细钢丝网笼束缚结合孤养,生理盐水灌胃,每日1次,连续3周,第4周仅孤养,不做其它任何刺激；四君组：细钢丝网笼束缚结合孤养,四君子汤(0.36g/mL)灌胃,每日1次；低剂量组：细钢丝网笼束缚结合孤养,柴胡疏肝散煎剂(0.52g/mL)灌胃,每日1次；高剂量组：细钢丝网笼束缚结合孤养,柴胡疏肝散煎剂(1.04g/mL)灌胃,每日1次。自造模之日起开始灌胃,灌胃时间为21d。用18F-FDG MicroPET/CT观察各组大鼠脑局部葡萄糖代谢变化。
3柴胡疏肝散对肝气郁结证模型大鼠脑多巴胺2型受体干预机制的MicroPET/CT初步研究：通过OFT将评分相近的15只大鼠随机分为空白对照组(对照组)5只,肝气郁结证模型组(模型组)5只,柴胡疏肝散治疗组(治疗组)5只。造模与给药同上。用11C-Raclopride MicroPET/CT观察各组大鼠脑D2R亲合力的改变。
结果：
1实验一结果：(1)与对照组相比,模型组大鼠体重增加缓慢(P<0.05),而治疗组大鼠体重稳步增加(P<0.05)。(2)干预3周后,与对照组相比,模型组大鼠蔗糖水偏好程度明显下降(P<0.01)；而治疗组大鼠蔗糖水偏好程度高于模型组(P<0.05)。(3)模型组大鼠水平运动、垂直运动得分明显下降,粪便粒数增多,与对照组相比有统计学意义(P<0.01),中央格停留时间有上升趋势；而治疗组大鼠水平运动得分、垂直运动得分均高于模型组,粪便粒数减少,与模型组比较有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.01),中央格停留时间有减少趋势。(4)模型组血浆ACTH、CORT含量高于对照组(P<0.05)；而治疗组血浆ACTH、CORT含量与对照组无差异,与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。(5)模型组血浆IL-6、TNF-α含量低于对照组(P<0.05)；而治疗组与对照组无差异,与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。(6)模型组前额叶皮质中5-HT、5-HIAA与DA含量与对照组相比呈减低趋势,NE含量与对照组相比呈增加趋势,但均无统计学意义(P>0.05)；治疗组与对照组、模型组相比无统计学差异(P>0.05)。(7)模型组海马中5-HT、5-HIAA与DA含量均低于对照组,有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.01),NE与对照组相比呈增加趋势,但无统计学意义(P>0.05)；治疗组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)；治疗组与模型组相比,5-HT、5-HIAA与DA含量均增加,有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.01),NE含量呈减少趋势,但无统计学意义(P>0.05)。(8)模型组下丘脑中5-HT、5-HIAA与DA含量均低于对照组,有统计学意义(P<0.05),NE与对照组相比呈增加趋势,但无统计学意义(P>0.05)；治疗组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)；治疗组与模型组相比,5-HT与DA含量均增加,有统计学意义(P<0.05),5-HIAA含量呈增加趋势,NE含量呈减少趋势,但均无统计学意义(P>0.05)。
2实验二结果：(1)与对照组相比,模型组脑葡萄糖代谢增高的脑区如下：延髓、左侧延髓、左侧小脑、右侧延髓,均具有统计学意义(P<0.05)；模型组脑葡萄糖代谢减低的脑区如下：左侧纹状体、右侧前额叶皮质、右侧S1与右侧S2(P<0.01)、听觉皮质、胼胝体、扣带皮质、M1、M2、S1、S2、岛叶皮质、左侧胼胝体、左侧M1、左侧M2、右侧丘脑、右侧海马、右侧胼胝体、右侧扣带皮质、右侧M1、右侧M2及右侧岛叶皮质(P<0.05),均具有统计学意义。(2)与模型组相比,低剂量组脑葡萄糖代谢增高的脑区如下：海马、前额叶皮质、M2、左侧纹状体、右侧听觉皮质、右侧海马、右侧前额叶皮质(P<0.01)、纹状体、中脑、下丘、听觉皮质、胼胝体、M1、左侧下丘、左侧海马、左侧胼胝体、左侧前额叶皮质、左侧M2、右侧纹状体、右侧丘脑、右侧胼胝体、右侧M1、右侧S1、右侧S2、右侧岛叶皮质(P<0.05),均具有统计学意义；低剂量组脑葡萄糖代谢减低的脑区如下：左侧延髓、左侧视觉皮质、左侧小脑(P<0.05),均具有统计学意义。(3)与模型组相比,高剂量组脑葡萄糖代谢增高的脑区如下：中脑、右侧前额叶皮质(P<0.05),均具有统计学意义；其它ROI二者比较无统计学差异。(4)与对照组相比,低剂量组脑葡萄糖代谢增高的脑区如下：下丘、左侧下丘,具有统计学意义(P<0.05)；低剂量组脑葡萄糖代谢减低的脑区如下：S2、左侧听觉皮质、左侧视觉皮质、左侧S1、左侧S2、左侧岛叶皮质(P<0.01)、S1、右侧视觉皮质(P<0.05),均具有统计学意义,提示上述脑区疗效较差。(5)与对照组相比,高剂量组脑葡萄糖代谢增高的脑区如下：延髓、右侧延髓,具有统计学意义(P<0.05),提示上述脑区疗效较差；高剂量组脑葡萄糖代谢减低的脑区如下：S1、S2、左侧S1,具有统计学意义(P<0.05),提示上述脑区疗效较差。
3实验三结果：(1)与对照组相比,模型组大鼠脑D2R亲合力(DVR反映D2R亲合力)增高的脑区如下：下丘、左侧下丘,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)；模型组大鼠脑D2R亲合力减低的脑区为：纹状体,具有统计学意义(P<0.05)。(2)与模型组相比,治疗组大鼠脑D2R亲合力增高的脑区如下：纹状体,具有统计学意义(P<0.05)；治疗组大鼠脑D2R亲合力减低的脑区如下：下丘、左侧中脑、左侧脑桥、左侧下丘,均具有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗组纹状体、下丘、左侧中脑、左侧脑桥、左侧下丘的D2R亲合力与对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。
结论：
1本研究侧重从行为学、神经内分泌、免疫系统、单胺类神经递质以及脑葡萄糖代谢、D2R亲合力角度验证评价肝郁证模型,认为慢性束缚应激结合孤养法3周可建立肝郁证大鼠模型。
2疏肝解郁法的代表方剂柴胡疏肝散具有治疗肝郁证的作用,其作用机制可能与其能够调节肝郁证模型大鼠血液的ACTH、CORT、IL-6和TNF-α及脑5-HT、5-HIAA. NE、DA有关,从而有效发挥抗肝郁作用。
3肝郁证模型大鼠存在脑局部葡萄糖代谢异常,总体表现为其相关脑区多呈现葡萄糖代谢减低,并以右侧半球为主；疏肝解郁法的代表方剂柴胡疏肝散对模型大鼠葡萄糖代谢减低的脑区具有增高作用,而对葡萄糖代谢增高的脑区具有减低作用,提示柴胡疏肝散对相关脑区葡萄糖代谢的双向调节作用可能是其治疗肝郁证的中枢作用机制之一同时获得了客观可视性依据。
4肝郁证模型大鼠脑D2R亲合力增高的脑区有：下丘、左侧下丘,脑D2R亲合力减低的脑区为：纹状体；疏肝解郁法的代表方剂柴胡疏肝散可改善模型大鼠相关脑区D2R亲合力的异常改变,此双向调节作用可能是其治疗肝郁证的中枢作用机制之一,同时获得了客观可视性依据。
5与对照组、模型组相比,高、低剂量组的脑葡萄糖代谢变化趋势基本一致,但变化幅度不同,总体而言,低剂量组的疗效显著优于高剂量组,提示中药量效关系复杂,有待深入研究。
6 MicroPET/CT是证候及中药研究的有力工具,可以提供客观可视性依据,更是临床与基础研究之间进行快速成果转化的桥梁。
