葡多酚抗脂质过氧化作用与机理的实验研究

目的：葡多酚(Grape procyanidins, GPC)是从葡萄中提取的天然植物多酚类活性物质，据国外研究报道具有抗氧化、抗自由基损伤、心血管活性等多种生物学功效。本实验研究采用体外与体内试验相结合的方法，对GPC抗脂质过氧化损伤的作用与机理进行了探讨。 方法：1、体外试验应用Fenton体系产生羟自由基，制备大鼠红细胞膜氧化损伤模型，采用荧光偏振法测定荧光偏振度、微粘度等膜脂流动性指标和生化方法测定丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活性，观察GPC对生物膜氧化损伤的影响。 2、动物试验采用小鼠腹腔注射阿霉素（ADR），制备高过氧化损伤动物模型, 3个试验组在注射ADR前7天分别预先给予口服灌胃GPC 10、100、200mg/kg。测定心肌线粒体腺苷三磷酸酶（ATPase）活性、血清心肌酶（CK）、心肌抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性以及MDA含量等指标。 3、应用电子自旋共振（ESR）和自旋捕集技术直接测定了不同浓度GPC对Fenton反应体系产生的羟自由基（.OH）、光照核黄素/EDTA体系产生的超氧阴离子（O）和Fe2+引发的线粒体膜脂质过氧化产生的脂类自由基（LOO.）清除作用。还采用鲁米诺化学发光技术（CL）测定GPC对羟自由基（.OH）、超氧阴离子（O）这两种自由基的清除作用。 结果：1、未经GPC处理的阳性对照组红细胞膜MDA含量升高，膜流动性下降，表明其受到氧化损伤。而红细胞膜经一定量GPC预先处理后，膜MDA含量明显减少，膜流动性显著提高。 2、同ADR阳性对照组比较经GPC预处理的各组，小鼠血清CK活性显著降低, 并能明显抑制ADR引起的小鼠ATPase活性的降低，提高血清总抗氧化能力，同时GPC对心肌SOD及肝组织GSH-Px活性诱导增高。 3、ESR方法葡多酚对羟自由基、超氧阴离子和脂类自由基的50%清除浓度（IC50值）分别为128.9 mg/L、89.4 mg/L、10.4 mg/L。化学发光法葡多酚对.OH、O的IC50值分别为193.1 mg/L、33.0 mg/L。提示葡多酚对三种活性氧自由基均有不同程度的清除作用，清除作用强度依次为LOO.> O>.OH。 结论：1、GPC可降低细胞膜和小鼠心肌、血清等组织成份的MDA等脂质过氧化产物的形成，增强SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性，保护线粒体ATPase活性，表明GPC对.OH引发的生物膜脂质过氧化、阿霉素诱发的小鼠心肌等组织的脂质过氧化均有良好的防护作用。 2、GPC对.OH、 O、LOO.三种活性氧自由基均有清除作用，表明其抗脂质过氧化作用与其清除自由基的作用有关，其抗氧化特点对脂质过氧化链反应的各环节均有作用，其中以对脂类自由基最强。