柚皮苷对体外培养兔关节软骨细胞增殖及SOD、NOS的影响

目的： 观察骨碎补有效成分柚皮苷对正常及经TNF-α诱导损伤的体外单层培养兔关节软骨细胞增殖的影响，以及对经TNF-α诱导损伤软骨细胞超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶的影响，从关节软骨细胞的角度探讨骨碎补防治骨关节炎的可能机制，为骨碎补用治骨关节炎提供实验依据。 方法： 1．原代分离兔关节软骨细胞经DMEM(含10％FBS)培养得到贴壁细胞，用倒置相差显微镜观察，MTT法绘制其生长曲线。行甲苯胺蓝染色。 2．MTT法测正常软骨细胞及经TNF-α诱导损伤的软骨细胞增殖率。 3．用TNF-α诱导损伤软骨细胞，测上清液中超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶的含量。 结果： 1．原代软骨细胞培养48h后基本贴壁，一般7天d可传代。甲苯胺蓝染色见细胞染成蓝紫色，细胞外基质染成浅蓝色。 2．100μg／ml，50μg／ml，25μg／ml，12.5μg／ml柚皮苷组对正常软骨细胞的增殖有明显的促进作用，与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，其中12.5μg／ml的促进作用最强；200μg／ml，100μg／ml，50μg／ml，25μg／ml柚皮苷组对经TNF-α诱导损伤软骨细胞的增殖有明显的促进作用，与实验对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，其中25μg／ml的促进作用最强。 3．各浓度柚皮苷组软骨细胞SOD活性均高于空白对照组和实验对照组，与空白对照组和实验对照组相比均有显著性差异(P＜0.05)。不同浓度的柚皮苷组，软骨细胞NOS活性均高于空白对照组，低于实验对照组，与实验对照组相比，各浓度柚皮苷组NOS活性均有显著性差异(P＜0.05)。 结论： 1．甲苯胺蓝染色可以对软骨细胞进行鉴定。 2．一定浓度的柚皮苷可促进软骨细胞的增殖。 3．柚皮苷可以显著提高软骨细胞SOD的活性，降低NOS的活性，可以减少TNF-α对软骨细胞的损害。