目的
内毒素性休克（septic shock）是由革兰氏阴性（G）菌感染导致
的一种严重临床综合征，全世界每年有超过100,000的病人因此而死亡。
一氧化氮（nitric oxide，NO）是内毒素性休克机体产生的一种重要生物
活性物质。研究证实，内毒素性休克时NO产量明显增多，提示NO在
内毒素性休克的发生发展中起着重要的作用。目前，对NO过量生成的
病理生理作用已有广泛的研究，而（lipopolysaccharide，LPS）刺激如
何使机体产生NO的细胞内信号机制尚未阐明。本研究通过观察不同药
物对LPS刺激单核巨噬细胞和内皮细胞产生NO的动力学过程的影响，
探讨细胞内信号转导通道在LPS诱导NO生成中的分子调控机制，为
临床救治内毒素性休克提供重要的理论基础。
方法
选择对LPS刺激敏感的巨噬细胞、内皮细胞，用不同刺激因素如
EGTA、肝素（Heparin）、维拉帕米（Verapamil）、A23187等在LPS
作用前刺激离体培养细胞，测定NO产量及PKC（protein kinase C）活
性。用亚硝酸盐法（Griess反应）测定LPS诱导NO生成的动力学过程及
量效关系；用粘附式细胞仪测定细胞内钙离子浓度；用同位素法（液体
闪烁计数仪）测定蛋白激酶C活性。
结果
1.LPS刺激RAW264.7细胞和ECV304细胞可明显产生NO，并于
48小时达到高峰。
2．LPS刺激细胞产生＊O时，K旷”h明显升高，与＊O的产量相对
应。
3．增加或减少细胞外Ca‘”内流，LPS刺激细胞产生NO的量相应
变化。
斗，增加或减少细胞外Ca‘”内流，PKC活性相应改变。
5．于R先应用细胞活性抑制剂（EGTA）及激动剂（A23 87）刺激细
胞，再加入最适浓度的LPS，细胞PKC肿胜及NO的产量发生相应变
化。
结论
1．LPS刺激RAW细胞、内皮细胞产生NO较晚，说明LPS可能是
通过诱导iNOS生成增加发挥作用的。
2．LPS刺激细胞产生NO依赖于细胞外Ca’”内流。说明LPS刺激细
胞产生＊0时，细胞外＊／内流维持细胞内高钙，是＊＊S诱寸＊O生成
的关键仆号。
3．PKC信号传导通路在LPS诱导NO生成过程中起重要作用。
4．LPS诱导 NO生成中可能依赖 CaZ’－PKC信号传导途径。
