柴胡皂苷a的药代动力学及药物相互作用研究

一、柴胡皂苷a在Caco-2细胞模型中吸收机制的研究 建立测定细胞悬液以及Hank's液中柴胡皂苷a的液相色谱—质谱联用的方法,运用细胞培养板和Millicell装置来研究柴胡皂苷a在Caco-2细胞中的吸收机制。研究发现,Caco-2细胞对柴胡皂苷a的摄取量与各自的摄取时间及给药浓度有关,60 min之后呈饱和趋势；柴胡皂苷a的摄取量随给药浓度的增大而增大,呈现良好的线性关系,其摄取量与温度无关,表明柴胡皂苷a在Caco-2细胞中的吸收方式为被动扩散。柴胡皂苷a的表观通透系数Papp (AP to BL)为3.45×10-8 cm·sec-1,表明柴胡皂苷a膜通透性差,可能导致低吸收；同时柴胡皂苷a的Papp (AP to BL)随给药浓度的变化而变化,继摄取实验再次证明柴胡皂苷a的吸收为被动扩散。进一步实验表明,EDTA能显著提高柴胡皂苷a的Papp,证明柴胡皂苷a的吸收机制为被动扩散中的胞旁扩散。因此,柴胡皂苷a吸收差可能是由于其极低的膜通透性所致,而其胞旁扩散的机制极可能是引起其膜通透性极低的原因之一。 二、柴胡皂苷a在大鼠体内的药动学研究 首先建立了测定柴胡皂苷a血浆药物浓度的液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用(LC-ESI-MS)的分析方法,探讨其在大鼠体内的药动学研究中的应用。将SD大鼠12只,随机分为2组,分别单剂量静注(5mg·kg-1)和灌胃(50mg·kg-1)柴胡皂苷a,用LC-MS法测定给药后的大鼠血药浓度,并利用DAS软件拟合并计算其药动学参数。试验结果表明,柴胡皂苷a的血药浓度在0.025～5μg·mL-1范围内线性关系良好,最低检测限为25 ng·mL-1,以质控样品计算,在各浓度水平下,此法的回收率均大于80%,日间和日内精密度小于10%,符合生物样品分析要求。大鼠单剂量灌胃(50 mg·kg-1)柴胡皂苷a后,其血药浓度都低于检测下限。随后加大给药剂量(200 mg·kg-1)发现血药浓度仍然较低,在1.5小时的血药浓度约为50ng·mL-1,其余都低于定量下限。大鼠单剂量静注柴胡皂苷a 5mg·kg-1后,血药浓度-时间曲线符合二室模型。主要药动学参数Tmax,Cmax, AUC(0-t), T1/2β, CL, Vd分别为：5min,1907μg·L-1,64370μg·h-1·mL-1,100.6min, 0.0867 L·min-1·kg-1,21.89 L·kg-1。该方法操作简便、快速、灵敏、专属性强,可用于柴胡皂苷a的体内大批量样品定量分析及药动学研究。 三、柴胡口服液与小柴胡颗粒对大鼠灌服环孢素药动学影响 将16只SD大鼠按体重进行随机区组设计,分为小柴胡组和柴胡口服液组。每日早晚每只大鼠灌胃给予CsA(10 mg·kg-1),试验d6早晨给药后分别于0、1、2、4、6、8、12、24、32h从尾静脉处采血0.6 mL。然后各组大鼠从试验的d 6到d10进行不同的预处理,即第一组每日早晚灌胃给予CsA(10mg·kg-1)和小柴胡颗粒(2 g·kg-1),第二组每日早晚灌胃给予CsA(10mg·kg-1)和柴胡口服液(2g·kg-1),连续给药5天。d12早上服药后按d 6的时间点采样。用HPLC法测定全血中CsA的浓度,计算其主要药动学参数并进行统计学分析。合并用药前两组间的CsA药动学参数无显著性差异；合并用药后,小柴胡组和柴胡口服液组CsA的Cmax、AUC0-32和AUC0-∞显著增大(P<0.05), CL、V/F、t1/2变化不明显(P>0.05)。试验结果表明,小柴胡和柴胡口服液均能显著提高CsA的灌服生物利用度,但对CsA的体内消除过程几乎没有影响。