大鼠牙根发育模式相关基因的筛选及部分基因功能的研究

牙齿的发育研究可以为牙齿再生及牙齿先天发育异常提供理论依据,同时牙齿发育也是发育生物学中器官发育形成的一个典型模型。目前牙齿早期发育研究较多,但后期的发育,特别是牙根发育相关基因研究较少。牙齿发育是口腔上皮组织与间充质组织相互作用的结果,牙根的发育与上皮根鞘有着密切关系,当牙冠发育即将完成之际上皮根鞘的形成揭开了牙根发育的序幕。本研究目的是利用大鼠下颌磨牙和切牙具有完全不同的牙根发育模式作为动物模型,对牙根发育相关的差异表达基因进行筛选并对部分差异基因的功能进行探讨,为牙根发育及牙根再生研究提供理论依据。 采用的方法及主要结果:本课题采用组织学、免疫组织化学、改良消减杂交技术、Northern blot、Western blot、RT-PCR、Real-time PCR、细胞培养、基因转染和RNA干扰等方法,进行了以下五部分实验研究: 第一部分 通过组织学观察大鼠下颌第一磨牙和下颌切牙的发育时序,结果发现胚胎18日(E18)大鼠磨牙和切牙发育开始出现差异,这种差异的表现是磨牙形成了双层细胞的上皮根鞘,开始启动牙根的发育,而切牙舌侧虽然也形成类似根鞘的结构,唇侧却仍然维持多层结构的颈环干细胞龛,始终未能启动牙根发育,仍旧保持牙冠的发育形式。 第二部分 实验1通过改良消减杂交技术,首次建立了大鼠牙根发育启动相关差异表达基因文库,文库总浓度约为1.5×10～4,经酶切鉴定含有500bp以上插入片段的克隆约为84%,表明所建立的基因文库质量较高,