目的:本课题是导师张伟教授所指导进行的序列实验研究中的一部分,此项研究是关于丹参对面神经损伤的影响。在前期的实验中,我们已证明了丹参注射液可有效抑制面神经元的凋亡,从而对面神经损伤修复起到积极的作用,但并未涉及其具体机制。本课题是继前期实验结果,通过动物实验以及免疫组化的方法研究丹参对大鼠面神经损伤后神经元bcl-2、Bax蛋白表达的影响,进一步探讨丹参注射液治疗面神经损伤的可能机制,从而为临床工作提供指导与参考。
方法:Wistar大鼠42只,不分性别,体重250—300g,由吉林大学动物中心提供。将大鼠采用随机数字表法随机分为空白对照组(2只)、面神经单纯离断后应用丹参组(20只)和应用生理盐水对照组(20只)。全麻下在面神经发出耳后支之远端离断面神经主干实验组(每只术前30min丹参注射液300mg/kg,腹腔注射);对照组(给予等量盐水),空白对照组暂不处理。
手术步骤:40只大鼠全麻醉后,沿耳后约1cm作水平切口,切开皮肤,沿外耳道后下壁分离,直至暴露右侧面神经主干及茎乳孔,游离面神经主干,在出茎乳孔处剪断,并去除3mm防止其再生。左侧不处置。生理盐水冲洗创口,依次对位缝合。术后实验组立即给予丹参(50mg/kg,腹腔注射),对照组给予等剂量盐水,此后2次/d,直到动物处死。其他2只大鼠不做任何处置作为观察Bax、bcl-2蛋白表达空白对照。分别于术后3d,7d,14d,21d,28d处死,各处死4只大鼠。取面神经核所在脑干。石蜡包埋、切片。SABC免疫组化染色,观察丹参对大鼠面神经损伤后神经元,bcl-2、Bax蛋白表达的影响。光镜下计数存活神经元数目。
结果:1、面神经横断伤后,丹参组与盐水组相比较,3天、7天,14天,21天,丹参组的运动神经元存活率明显高于盐水组,抑制面神经运动神经元的死亡;2、神经损伤后bcl-2和Bax都有表达,bcl-2表达逐渐减少,Bax表达逐渐增加,丹参能增加Bcl-2表达,抑制Bax表达,使bcl-2、Bax形成异二聚体,丹参组较盐水组bcl-2/Bax增大。即,使结果向抑制面神经细胞凋亡方向发展,从而提高面神经损伤后运动神经元的存活率;
结论:在面神经损伤后,丹参可以使面神经核中bcl-2与Bax的动态平衡趋于抑制神经细胞凋亡的结果,阻止caspase-9途径的激活,抑制面神经元凋亡,因此提高了面神经运动神经元的存活率。
