豆蔻提取物联合5-FU抑制人胃腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的实验研究

[目的和意义] 胃癌是临床上常见的恶性肿瘤之一,传统治疗胃癌以手术切除及放化疗为主,但总的治疗效率不尽如人意,寻求新型抗癌药物,采用多种有效治疗手段的联合应用,发挥协同作用,是肿瘤未来治疗发展趋向之一。中医中药、中西医结合治疗胃癌,在我国的临床实践中证明有一定的作用。近年来,诸多研究者致力于深层次探讨中药抗肿瘤的作用机制,发现部分中药特别在与其他治疗手段联合应用治疗肿瘤时往往效果更好,且对人体副作用相对较小,有着单纯使用西药可能无法比拟的疗效。白豆蔻就是其中一种具有抑癌特性的中药,其提取物可增强机体对肿瘤的免疫功能,破坏癌细胞外围防护因子,使癌细胞容易被损害。前期的体外细胞实验表明,豆蔻提取物可抑制人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖。本实验通过建立裸鼠胃腺癌SGC-7901细胞株皮下移植瘤模型,研究豆蔻提取物联合5-FU对人胃腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,并探讨其可能的机制,进而为豆蔻提取物作为一种抗胃癌药物应用于临床提供初步的实验依据。 [方法] 本课题通过对人胃腺癌细胞株SGC-7901进行体外细胞培养,建立人胃癌细胞皮下移植瘤模型,将成瘤的24只实验裸鼠随机分成四组,每组六只。对照组:给予磷酸盐缓冲液(PBS液)0.2ml灌胃,1次/日,共四周;PBS液0.2ml腹腔注射,隔天一次,共七次。豆蔻提取物组:给予豆蔻提取物制剂1g/(kg﹒d)灌胃,1次/日,共四周;PBS液0.2ml腹腔注射,隔天一次,共七次。5-FU组:给予PBS液0.2ml灌胃,1次/日,共四周;5-FU 20mg /(kg﹒d)腹腔注射,隔天一次,共七次。联合组(豆蔻提取物+5-FU):给予豆蔻提取物制剂1g/(kg﹒d)灌胃,1次/日,共四周;5-FU20mg /(kg﹒d)腹腔注射,隔天一次,共七次。每日观察裸鼠的一般情况,测量皮下肿瘤的大小及裸鼠体重,绘制肿瘤生长和动物平均体重时间曲线图。实验结束后,处死瘤鼠,测量裸鼠皮下移植瘤体积,称瘤重,计算瘤重抑制率,HE染色观察肿瘤的形态特征。用免疫组化法检测各组移植瘤瘤体中环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达;CD34标记血管内皮细胞测定肿瘤的微血管密度(MVD)。 [结果] 1、成功建立胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。 2、实验结束后,对照组裸鼠体重下降程度明显,与豆蔻提取物组、5-FU组和联合组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。 3、各组移植瘤体积:对照组为(1424.38±188.62)mm3,豆蔻提取物组(800.52±163.55)mm3,5-FU组为(574.21±115.73)mm3,联合组(322.65±62.39)mm3。瘤重分别为:对照组为(1.822±0.24)g,豆蔻组(0.987±0.20)g,5-FU组为(0.662±0.12)g,联合组(0.414±0.09)g。可以看出豆蔻提取物组、5-FU组、联合组的平均瘤重,瘤体积与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而联合组的平均瘤重,瘤体积与单用豆蔻提取物和5-FU相比,差异有统计学意义(P<0.05)。 4、各药物干预组瘤重抑瘤率分别为:豆蔻提取物组45.83%,5-FU组63.67%,联合用药组77.28%。 5、HE染色光镜下观察肿瘤:对照组移植瘤细胞具有典型的恶性肿瘤细胞的形态特征,即细胞核大、深染,核异型性明显,病理性分裂相多见,肿瘤细胞数量多,排列紊乱,血窦丰富。豆蔻提取物组及5-FU组仍可见肿瘤细胞的形态特征,但肿瘤细胞数量相对减少,并可见肿瘤细胞肿胀变性等改变。联合组肿瘤细胞呈圆形或椭圆形,淡染,核分裂少见,瘤细胞数量明显减少,可见较多肿瘤细胞肿胀变性坏死,甚至大片坏死,间质内血管减少。 6、免疫组化示:移植瘤中VEGF,COX-2蛋白表达水平和MVD计数,豆蔻提取物组和联合组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。而以联合组差异更显著(P<0.01)。 [结论] 1、豆蔻提取物,5-FU及两者联用均可抑制人胃腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,降低肿瘤的体积和重量。 2、豆蔻提取物与5-FU两者联用较单用组抑制裸鼠皮下移植瘤生长的作用强,两者联用具有协同作用。 3、豆蔻提取物抑制人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用机制可能与下调瘤灶中VEGF,COX-2蛋白表达,减少瘤灶内MVD有关。