疯草（甘肃棘豆）生物碱系统分析及其毒性的比较病理学研究

本试验通过对疯草(甘肃棘豆)生物碱成分的系统分析及其毒性的比较病理学研究，取得了以下结果： 1．疯草(甘肃棘豆)生物碱成分的提取：本试验对疯草(甘肃棘豆)生物碱进行了系统提取，结果表明，疯草(甘肃棘豆)含有小极性、中等极性和大极性生物碱，从各极性段所得的量可以看出，主要以大极性生物碱为主；各极性段生物碱经TLC检查，不含臭豆碱、黄华碱等喹诺里西啶生物碱，而含有苦马豆素等吲哚里西啶生物碱，在大极性生物碱中苦马豆素是其主要成分。 2．疯草(甘肃棘豆)生物碱成分柱层析分离：采用硅胶柱层析对疯草(甘肃棘豆)生物碱进行了分离，得到2个单体化合物(结晶A、结晶D)和B、C、E、F段生物碱混合物。结晶A为淡黄色针状结晶，有紫色荧光，改良碘化铋钾显色弱；结晶D为黄色片状结晶，有紫黑色荧光，硫酸乙醇显黄色，改良碘化铋钾显褐色；B段改良碘化铋钾显色呈现5个桔红色斑点；C、E、F段Ehrllich’s试剂显色呈现5～8紫红色斑点。 3．疯草(甘肃棘豆)生物碱结构鉴定：采用GC—MS联用技术对疯草(甘肃棘豆)小极性及中等极性生物碱进行了结构鉴定，从中鉴定出5，6，7，8-四氢吲哚里西啶、1，2，3，4-四氢喹啉、N-苯基-2-吡啶丙酰胺、1-乙酰基-9氢-吡啶[3，4-B]吲哚、3-甲氧基-4，7-甲基-1-氢-异吲哚、吡略烷类、二苯胺、3-丁基吲哚里西啶等41种生物碱成分；采用HI—MS分析技术对疯草(甘肃棘豆)大极性生物碱经乙酰化、锌还原处理前后比较分析，从中鉴定出5种生物碱成分即：苦马豆素(Swainsonine)、氧化氮苦马豆素(Swainsonine N-oxide)、斑荚素(Lentiginosine)、倒千里光裂碱(Retroecine)和2-羟基吲哚里西啶(2-Hydroxyindozidine)，其中倒千里光裂碱和2-羟基吲哚里西啶为首次在甘肃棘豆中发现：结晶A经IR、MS、1HNMR初步鉴定为N-苯甲酰基甘氨酸甲酯，结晶D经UV、IR、1HNMR、13CNMR鉴定为5，7—二羟基—4′—甲氧基黄酮，为首次在甘肃棘豆中分离到。 三 疯草（甘肃棘豆）生物碱系统分析及其毒性的比较病理学研究 4．变异黄蔑、宽苞棘豆与甘肃棘豆生物碱的比较分析：采用TLC技术对变异黄 尾 宽苞棘豆及甘肃棘豆生物碱进行了比较分析，结果表明，这三种疯草生物碱种 类基本相似，都属于叼跺里西睫生物碱：从各极性段量的多少可以看出，三种疯草 生物碱主要集中在正丁醇部分，且苦马豆素为其主要成分。 5．疯草（甘肃棘豆）生物碱的毒性研究：每天按S00mg八g剂量给小鼠、雏鸡 灌服疯草（甘肃棘豆）总生物碱，在灌服的第15－20d可复制出疯草中毒的典型病 变，主要表现为肝、肾等实质器官的空泡变性，表明疯草（甘肃棘豆）主要有毒成 分是苦马豆素。 6．披针叶黄华生物碱提取、分离与结构鉴定：采用醇类溶剂提取法对披针叶黄 华生物碱进行了提取、分离与鉴定，结果表明，披针叶黄华干草中生物碱含量为 1．90％；总生物碱经GC－－MS联用分析技术，从中鉴定出臭豆碱、黄华碱、鹰瓜豆 碱、金雀花碱、N－甲基金雀花碱、白羽扇豆碱等12种睦诺里西陡生物碱，其中 Dodecah叩ro－7，14Methanodiprpdoll，2－a：1’，2’－E］［1．＊diazocine、1－Ace…－l，2，3， 4tetrahydro－5－（－plperdinyl）prpdine、7，14－Methano－ZH，6H－iprpdo［1，2－a：1’，2’－ e］ ［1a山一 儿1－m一hy卜3－（－d汀。phmp口7，1个＊＊m。＊－4H，6H刁lp加加［1，2－a：1 ’，2e，51diazs种化合物为首次从该植物中发现。 7．披针叶黄华的毒性研究：从细胞水平和亚细胞水平对披针叶黄华中毒山羊病 理学进行了研究，结果表明，病理组织学变化以实质器官细胞颗粒变性为主；特别是 肝脏结缔组织和胆管增生；超微结构变化以肝脏胶原纤维增生为特征，这是肝硬化 的典型病变。这些病变与疯草中毒的典型病变完全不同。