雷公藤系卫矛科雷公藤属植物雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.的干燥根及根茎,具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节及抗生育等多种生物活性,常用于类风湿关节炎、慢性肾炎、系统性红斑狼疮等难治性疾病的治疗,是临床较为广泛使用的一味中药。但随着近年来对雷公藤临床使用量的增多及研究的深入,发现其在发挥疗效的同时,又出现了一系列与治疗目的无关的毒副作用,如肝毒性、肾毒性等,使其在临床上受到了很大限制。如何最大限度地制约其毒性,存或增其疗效,已成为临床上亟待解决的有示范意义的研究课题。新风胶囊由黄芪、薏苡仁、雷公藤、蜈蚣4味中药组成,方中雷公藤为毒性药材,但临床应用多年,经过大量的临床验证,证明其在用于类风湿关节炎方面疗效显著、确切、未见明显的雷公藤所存在的毒副作用、剂型合适、质量可控,适于患者长期服用。通过配伍降低雷公藤的毒性,是雷公藤减毒的一个重要的对策,故本课题在中医配伍减毒理论的指导下,借助新风胶囊的配伍拆方试验研究,考察方中雷公藤不同配伍组对大鼠主要靶器官的毒性差异,筛选出新风胶囊中减雷公藤毒性的最佳配伍方,并从物质基础角度考察配伍前后的主要成分变化,明确雷公藤减毒的新思路与新方法,提高雷公藤在临床使用的安全性。目的:(1)建立新风胶囊中含雷公藤小复方的拆方组方方法。(2)基于实验筛选出减雷公藤毒性的最佳配伍方。(3)考察减雷公藤毒性的最佳配伍组的物质基础变化。方法:(1)采用L8(23)三因素两水平正交试验水平表给予新风胶囊及其拆方组合处理;(2)采用现代药理方法完成大鼠血、心、肝、肾、卵巢(睾丸)标本的采集及制备;(3)采用Elisa法测定不同组鼠血生化指标,比较各组对心、肝、肾脏、卵巢(睾丸)组织的影响。心功能相关指标:肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB);肝功能相关指标:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);肾功能相关指标:肌酐(CREA)、尿素氮(BUN);生殖系统相关指标:雌鼠以血清性激素水平孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH),雄鼠以血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)水平为考察指标。(4)采用标本处理后光镜、观察比较拆方后各组对主要毒性靶器官(心、肝、肾、卵巢、睾丸)的组织形态学的改变。(5)采用高效液相色谱法比较最佳配伍方中雷公藤内酯甲和雷公藤内酯酮的含量变化。结果:(1)连续灌胃给药结束后,与空白对照组比,雷公藤组大鼠血清中ALT、AST含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),提示雷公藤组肝细胞可能受到损害。雷公藤各配伍组与雷公藤组比较,雷黄组、雷薏组、雷黄薏、雷黄蜈、雷蜈薏组ALT、AST的含量均有所下降,其中雷黄组能显著的降低两指标含量,雷薏组可以显著的降低AST含量,差异具有统计学意义(P<0.05)。余组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与空白对照组比,雷公藤组和雷蚣组大鼠血清中CREA与BUN水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。提示雷公藤和蜈蚣对大鼠肾脏可能具有一定的损害程度。雷公藤各配伍组和雷公藤组比较,黄芪配伍雷公藤组的CREA、BUN两指标降低明显,雷薏组和雷黄薏组的BUN均降低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。其余各配伍组除雷蜈组外,均可降低CREA、BUN水平,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)连续灌胃给药结束后,与空白对照组相比,雷公藤组大鼠血清中CK与CK-MB水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。雷公藤各配伍组和雷公藤组比较,黄芪配伍雷公藤组的CREA、BUN两指标降低明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。其余各配伍组除雷蜈组外,均可降低CK-MB水平,除雷蜈组和雷黄蜈和雷蜈薏组外,均可降低CK水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。提示说明黄芪配伍雷公藤后可以减轻雷公藤所致的心脏损害,对心脏具有一定的减毒作用。(4)通过配伍后两指标的变化来看,雷公藤组相比于空白组可以降低雄性大鼠的T和LH水平,且雷公藤组降低最明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。与雷公藤组进行比较,雷黄薏组可以显著升高T、LH水平(P<0.05),雷黄薏组可以显著升高T水平(P<0.05),其余组相比雷公藤组两指标变化不明显。提示说明黄芪配伍雷公藤可以一定程度上降低雄性生殖系统毒性。(5)与空白对照组进行比较,雷公藤组大鼠血清中P水平显著降低,且FSH、LH水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。其余各配伍组和雷公藤组比较,均能升高P、降低FSH、LH水平,其中雷薏组升高P、降低FSH、LH水平最为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。(6)光镜结果显示,雷公藤不同配伍组在心、肝、肾、睾丸、卵巢的组织形态学较空白组损害有不同程度的减轻,综合各个靶器官,其中雷黄组最为明显。(7)黄芪配伍雷公藤后雷公藤内酯甲、雷公藤内酯酮的含量均低于雷公藤组中的雷公藤含量。结论:通过拆方配伍组对雷公藤的主要靶器官毒性的考察,综合发现黄芪配伍雷公藤组能降低雷公藤所致的靶器官毒性,且黄芪配伍雷公藤后能降低雷公藤内酯甲和雷公藤内酯酮的含量,从而从物质基础方面验证了黄芪配伍雷公藤后降低雷公藤的毒性。
