5-HT5A受体在长春新碱致神经病理性痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化中的作用

目的评价5-羟色胺5A受体(5-HT5AR)在长春新碱致神经病理性痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化中的作用。 方法第一部分:新生SD大鼠,断头处死后取大脑皮质,剪碎并胰酶消化后制成细胞悬液,网筛过滤,接种培养10 d。采用免疫荧光技术观察5-HT5AR在原代培养星形胶质细胞中的表达。雄性成年SD大鼠20只,体重180～200 g,随机分为2组（n=10）:对照组和模型组。测定两组基础机械痛阈值后,模型组第1～5天和第8～12天每天定时腹腔注射0.1 mg/kg长春新碱建立大鼠神经病理性痛模型,对照组腹腔注射生理盐水。腹腔给药结束第2天测量大鼠机械痛阈,然后处死,取L4～5脊髓组织,Western-blot测定5-HT5AR的表达,免疫组化检测脊髓背角星形胶质细胞胶原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达及活化评分。第二部分:雄性成年SD大鼠30只,体重180～200 g,随机分为3组（n=10）:神经病理性痛组（P组）、空载体腺病毒组（B组）和siRNA重组腺病毒载体组（S组）。三组大鼠均按第一部分方法测定机械痛阈并建立大鼠神经病理性痛模型。腹腔给药结束第2天测定机械痛阈,然后P组、B组和S组分别鞘内注射人工脑脊液、空载体腺病毒和siRNA重组腺病毒载体(Ad-5-HT5A-siRNA)25μl。鞘内注射后第7天测定机械痛阈,然后处死大鼠,取L4～5脊髓组织,测定5-HT5AR的表达,检测脊髓背角星形胶质细胞GFAP的表达及活化评分。 结果1. 5-HT5AR在原代培养的星形胶质细胞胞膜和胞浆中均有明显表达。腹腔给药结束后第2天,与对照组比较,模型组大鼠机械痛阈下降,脊髓背角星形胶质细胞活化显著,5-HT5AR及GFAP表达均上调（P<0.05）。2.与基础机械痛阈比较,P组、B组和S组各时点机械痛阈均降低;与P组比较,S组鞘内注射后第7天机械痛阈降低,脊髓背角星形胶质细胞活化显著,5-HT5AR表达下调,GFAP表达上调（P<0.05）,B组上述指标差异无统计学意义（P>0.05）。 结论:5-HT5AR参与了脊髓背角星形胶质细胞活化的抑制过程,从而减轻长春新碱所致大鼠神经病理性痛。