目的：在建立稳定、可靠的视神经损伤动物模型的基础上,从分子、基因角度观察黄芪对视网膜组织神经生长因子及其受体的调节作用,探讨黄芪视神经保护可能的分子机制。方法：首先采用横向定量牵拉法构建视神经损伤动物模型,并利用荧光金立体定位注射法对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)逆行标记,检测RGCs的存活率,以评价横向定量牵拉法制作视神经损伤动物模型的可行性；造模成功后,将大鼠随机分为假手术组、模型组及黄芪治疗组共计3组,假手术组不予任何药物治疗,模型组给予生理盐水腹腔注射,治疗组给予黄芪注射液腹腔注射,治疗14天后取新鲜视网膜组织,采用Western Blot、real-time PCR、ELISA及EMSA等实验方法,观察各组大鼠视网膜组织神经生长因子及其受体相关蛋白、基因的表达情况,并进行组间差异比较。结果：(1)模型评价结果：通过横向定量牵拉法制作大鼠视神经损伤模型,正常对照组RGCs形态多呈圆形或椭圆形,边界清楚,细胞外无明显荧光染料渗漏,部分可见明显细胞突起；而视神经牵拉伤后RGCs随时间延长而不断减少,细胞分布不均匀,并可见大量荧光渗漏及小胶质细胞。正常对照组(右眼)与假手术组(仅暴露视神经的左眼)的RGCs密度相比较差异无统计学意义(P=0.283>0.05),说明仅暴露视神经而不予牵拉不会造成视神经损伤；而视神经牵拉伤后第1d、3d、7d及14d的RGCs数量逐渐减少,其密度均明显低于正常对照组(P<0.01)；且存活率进行性下降(78.94%、60.07%、38.32%、17.31%,P<0.01),显示了RGCs的损伤过程。(2)分子机制实验结果：在视神经损伤之后,模型组手术眼的NGF、TrkA及NFκB蛋白表达与正常对照眼比较明显下调(P<0.05),而JNK、P-JNK蛋白表达量及p75NTR mRNA水平明显高于非手术眼(P<0.05)；然而,经过黄芪注射液治疗14天后,NGF及其高亲和力受体TrkA蛋白表达均较模型组增高(P<0.05),且NGF的低亲和力受体p75NTR的基因表达以及其胞内促凋亡信号JNK、P-JNK蛋白活性表达均降低(P<0.05),而抗凋亡信号NFκB蛋白表达量较模型组明显升高(P<0.05),结果提示黄芪注射液对视神经牵拉伤模型大鼠的视神经具有保护作用。结论：(1)横向定量牵拉法可以建立易于量化的视神经损伤动物模型,该模型自损伤第一天即出现视网膜神经节细胞死亡,随着时间推移,损伤程度逐渐加剧,RGCs数量逐渐减少,因此,可作为稳定可靠的动物模型进一步进行视神经损伤机制和治疗研究；(2)黄芪对视神经牵拉伤模型大鼠的视神经具有保护作用,其可能的作用机理包括：①黄芪能够促进视神经损伤大鼠视网膜组织中NGF的表达,并提高NGF与其高亲和力受体TrkA的表达,从而激发神经生长因子与TrkA受体结合后所介导的神经修复机制；②黄芪可以降低NGF的低亲和力受体p75NTR mRNA表达,从而抑制NGF与p75NTR结合后所介导的神经细胞凋亡机制,并通过上调NF-κB的蛋白表达而促进神经修复,提高神经元的抗损伤能力,起到视神经保护作用。目的：观察加味神效黄芪汤治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变(nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy, NAION)的临床疗效,客观评价其对NAION患者视功能的影响。方法：采用随机对照的研究方法,对35例(41只眼)NAION患者进行观察,对照组采用常规基础综合治疗方案,观察组在对照组基础上给予加味神效黄芪汤配方颗粒口服,分别记录两组患者治疗前及治疗1个月后的最佳矫正视力(best corrected visual acuity,BCVA)、视野以及视觉诱发电位的变化,对临床疗效进行评价。结果：(1)综合疗效：本研究所观察的35例患者,41只眼中,观察组显效8眼,有效11眼,无效5眼,总有效率为79.17%,对照组显效2眼,有效8眼,无效7眼,总有效率为58.82%。(2)最佳矫正视力：两组的最佳矫正视力在治疗前后的变化均具有统计学意义,其中观察组由治疗前的0.43±0.35提高至治疗后的0.54±0.36(P<0.01),对照组由治疗前的0.44±0.35提高至治疗后的0.52±0.37(P<0.01);经药物治疗后,虽然观察组患者BCVA提高的程度比对照组BCVA提高的程度大,但无明显统计学差异(P>0.05),提示两组用药对最佳矫正视力的影响差异不大。(3)视野：①观察组的视野平均敏感度(mean sensitivity,MS)由治疗前的10.03±4.89提高至治疗后的13.68±5.03,且差异具有显著性(P<0.01),而对照组视野MS虽由治疗前的10.92±5.61提高至11.88±5.24,但是差异不具有统计学意义(P=0.059>0.05)；②观察组的视野平均缺损(mean deviation, MD)在治疗前后的变化具有统计学意义(P<0.01),由治疗前的16.85±5.48降至治疗后的13.13±5.67,但对照组由治疗前的15.62±5.26降至治疗后的14.47±4.67(P=0.114>0.05)；③虽然与对照组比较,观察组对视野MS、MD影响均无明显差异,但是,观察组的视野MS和MD改善幅度均优于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。(4)视觉诱发电位：两组患者经治疗后P100峰潜时延迟均较治疗前改善(P<0.01),但对比观察组与对照组在治疗后的P100峰潜时无显著差异(P>0.05)；两组患者的视觉诱发电位N75-P100振幅在治疗前后的变化均具有统计学意义,并且治疗后观察组N75-P100振幅提高明显优于对照组,具有统计学差异(P<0.05)。结论：加味神效黄芪汤联合常规治疗的综合方案可以有效提高患者的视力、视野光敏感度,并减少视野缺损范围,另外,此方案还可以有效提高患者的视觉诱发电位N75-P100振幅强度和改善视觉诱发电位P100峰潜时延迟,从而提高患者视功能的质量。
