腹腔置管引流对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤影响的实验研究

目的：重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是常见的急重症之一，容易引起多器官功能障碍(multiple organ dysfunctionsyndrome，MODS)而使病情迅速恶化。SAP早期胰腺释放出血管活性多肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)等物质具有很强的肾毒性，同时大量活化的胰蛋白酶又可激活肾素-血管紧张素系统，使肾小球血管收缩，导致肾小球灌注压下降，多种因素叠加最终引起急性肾功能损伤。SAP时产生大量腹水，使机体的有效循环血量下降，进而使肾脏的血供严重不足；腹腔渗出大量炎性液体，其内含有坏死组织、细菌毒素、蛋白分解产物、细胞因子、各种酶等，可通过腹膜吸收进入血循环，对肾脏也有很大毒性。近年来成都军区总医院普外中心采取的腹腔置管引流为主的多种微创方法治疗SAP患者取得了良好疗效，避免了行传统胰腺坏死组织清除及腹腔积液引流的手术创伤及风险。但是目前腹腔置管引流对SAP治疗作用机制尚缺乏进一步研究。本实验通过检测SAP大鼠腹腔置管引流不同时间点的血清淀粉酶(AMY)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、核因子κB(NF-κB)水平，腹水淀粉酶(AMY)、核因子κB(NF-κB)水平，检测肾脏组织中NF-κB蛋白表达，以及观察胰腺、肾脏组织的病理变化，以探讨腹腔置管引流对SAP大鼠肾损伤的影响及可能机制。方法：1.将72只Wistar大鼠，适应性喂养1周，随机数字表法分为3组：A组(SAP组）,B组(SAP引流组）,C组(假手术对照组），每组24只大鼠，各组又分术后6、12、24h三个时相点，每时相点分配8只，所有大鼠术前12h及术后禁食不禁水。三组动物模型制备方法如下：(1)A组：参照Aho法，腹腔注射3%戊巴比妥钠（0.1ml/100g体重）麻醉，开腹后动脉夹夹闭肝门部胆管，经十二指肠乳头逆行胰胆管穿刺，用输液泵以3ml/h的速度注射5%牛磺胆酸钠(０.1ml/100g体重)，3～5min内注完，注射完毕后用动脉夹夹闭近十二指肠端的胰胆管10分钟。肉眼见胰腺组织充血、水肿、出血、坏死等改变后，确认大鼠SAP动物模型制备成功，关腹；（2）B组：在A组基础上，在大鼠下腹部安置腹腔引流管，切口旁戳孔引出，外接引流袋；（3）C组仅行开腹手术，翻转十二指肠和胰腺后关腹。所有大鼠均在背部按照40ml/kg体重注射37℃的生理盐水，每12小时注射一次，共两次。2.各组分别于造模后6、12、24h三个时间点，处死大鼠，腹主动脉采血，离心机3000r/min离心10min，取上层清液置于－20℃冰箱保存，以备检测；收集引流袋内腹水，3000r/min离心10min，取上层清液于-80℃冰箱保存，以备检测。将肾组织置于4%中性甲醛缓冲液中固定。取胰腺和肾脏组织经液氮冷冻后，于-80℃冰箱保存。采用全自动生化分析仪检测血清及腹水淀粉酶，血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr),ELISA法测定血清及腹水核因子κB(NF-κB)水平，免疫组织化学法测定肾脏组织NF-κB蛋白表达,观察胰腺及肾脏组织冰冻切片HE染色观察病理变化。3.数据处理采用SPSS19.0统计软件，各组数据均用－x±s表示，两样本均数间比较采用t检验，多样本均数比较采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。结果：1.A组大鼠造模成功后出现活动减少，精神萎靡，食欲下降，尿量减少；且随时间延长，上述症状逐渐加重。B组较A组大鼠活动、精神、食欲更好，尿量更多；随腹水不断引流，症状逐渐改善。C组大鼠术后活动、精神、食欲、尿量变化不明显。2.A组、B组较C组大鼠血清淀粉酶、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、NF-κB显著升高，腹水淀粉酶、NF-κB显著升高，胰腺及肾出现病理变化，肾组织NF-κB蛋白表达增多；B组较A组血清淀粉酶、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、NF-κB及腹水淀粉酶、NF-κB显著降低，胰腺及肾病理变化减轻，肾组织NF-κB蛋白表达减少。结论：1.采用开腹手术，逆行胰胆管注射牛黄胆酸钠，可以成功制备大鼠SAP模型。2.通过腹腔置管引流出大鼠胰腺炎相关性腹水（PAAF)，可以显著改善SAP大鼠的症状。3.引流出大鼠腹腔胰腺炎相关性腹水（PAAF)后，可降低SAP大鼠血清淀粉酶(AMY)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、核因子κB(NF-κB)的水平，降低腹水淀粉酶(AMY)、核因子κB(NF-κB)的水平，减少肾脏组织NF-κB蛋白表达，显著减轻SAP大鼠胰腺和肾脏病理损伤。