目的:过度训练可以引起机体损伤,包括肾脏在内的多个脏器受累。如何防止运动损伤是目前运动医学界的研究重点。本研究通过让大鼠游泳至力竭,建立过度训练模型。通过检测大鼠生化指标及观察肾脏病理变化了解肾脏功能的改变及损害程度,应用末端脱氧核苷转移酶介导的缺口标记法(TUNEL)检测大鼠力竭后不同时间肾脏组织细胞凋亡情况,并对细胞凋亡的机制进行研究,同时也观察了东莨菪碱对上述变化的保护作用。
方法1.分组雄性Wistar大鼠42只,体重200-220g,分为安静对照组(A组);力竭运动后即刻组(B组);力竭运动后6小时组(C组);力竭运动后12小时组(D组);力竭运动后24小时组(E组);力竭运动后6小时+东莨菪碱组(F组);力竭运动后24小时+东莨菪碱组(G组)。2.建立过度训练肾损伤动物模型各实验组大鼠于实验第一天适应性游泳30分钟,第二天放于水中,游泳至力竭,并记录游泳时间。F组、G组大鼠在第二天入水前于腹腔注射东莨菪碱,5mg/kg。3.取材力竭后即刻组大鼠于发生力竭后乙醚麻醉,腹部正中切开,于门静脉采血,分别注入干管和抗凝管待测,并摘除双肾,置入4℃4%多聚甲醛中固定。其余各实验组也于相应时间运用同样的方法取材,并收集尿液。4.使用全自动生化仪检测尿γ-谷氨酰转肽酶及血生化指标;制作病理切
片,观察病理改变;应用TUNEL技术检测肾脏组织细胞凋亡;应用免疫组化SP法检测肾组织IGF-1、Fas-L、Bcl-2、Bax蛋白的表达。
结果:1.大鼠力竭后血清各生化指标逐渐升高,6小时升至最高,其中尿素氮、磷酸肌酸肌酶升高明显(P<0.01 ),24小时恢复正常。尿r-GT 6小时升高不明显(P>0.05),12小时,24小时明显升高(P<0.01 ),使用东莨菪碱的大鼠力竭后各项生化指标也升高,但幅度明显下降(P<0.05)。2.使用药物的大鼠游泳时间较未使用的明显延长(P<0.01)。3.力竭后大鼠肾脏在光镜下有缺血性改变,力竭后24小时可以观察到部分肾小管上皮细胞刷状缘脱落,还可见浸润细胞。东莨菪碱组大鼠在6小时及24小时光镜下均未发现明显异常。4.对照组大鼠肾脏偶见凋亡细胞,力竭后肾脏细胞凋亡逐渐增加,24小时于皮髓质交界处及髓质见大量的凋亡细胞。东莨菪碱组大鼠,在力竭后6小时及24小时,和未使用药物的大鼠比较肾脏组织细胞凋亡均明显减少(P<0.01 )。5.正常大鼠肾脏IGF-1有一定表达,力竭后表达明显下降(P<0.05),后又逐步增强。Fas-L在正常大鼠肾小管弱表达,力竭后表达增强(P<0.05),12小时、24小时增强更明显(P<0.01)。力竭后6小时肾小管Bcl-2表达减弱,12小时组表达较对照明显减弱(P<0.05)。力竭后Bax表达逐渐增强,在24小时较对照组增强明显(P<0.01)。力竭后东莨菪碱组Bcl-2表达增强,其余和对照组比较无明显变化P>0.05)。
结论:1.通过让大鼠游泳到力竭建立了过度运动致肾脏损伤模型,发现过度运动可造成肾脏损伤,损伤相对比较轻微,为可逆性,而细胞凋亡可能是损伤的主要机制。2.我们
