白桦花发育不同时期内源激素及蛋白质变化分析

本论文以白桦花为材料，在花发育形态解剖学观察的基础上，分析了花发育不同时期内源激素含量的变化及蛋白质的变化。旨为揭示内源激素与花发育的关系获得与花特定发育时期的相关蛋白，为从分子水平上揭示白桦开花结实机理奠定基础。 采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定了白桦雄花发育过程中的赤霉素(GA)、玉米素核苷(ZR)、脱落酸(ABA)及吲哚乙酸(IAA)含量变化。研究了这些内源激素与白桦雄花发育的关系。研究结果表明：低含量的GA及花分化初期低含量的ABA、IAA、ZR有利于白桦雄花的分化，高水平的ABA、ZR和IAA能促进雄蕊原基分化及孢原细胞的形成。 采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术研究了白桦雌花不同发育时期的蛋白质变化，确定了白桦花序蛋白质提取及凝胶银染的最佳方法。研究结果表明，在花序原基和苞片原基分化发育阶段初期存在40.1kD的差异蛋白谱带，随着花序原基的分化，雌蕊原基的产生至进入休眠状态的过程中又出现了新的蛋白差异谱带：23.5kD蛋白和21.9kD蛋白。 采用双向电泳(2-dimensional electrophoresis，2-DE)技术对白桦雄花花序发育初期、花序发育过程中及花器官形成时期的蛋白质样品进行了分析，建立了适合于白桦雄花的双向电泳方法，即用提取缓冲液Ⅳ和改良TCA-丙酮沉淀法提取蛋白质，蛋白加样量为50μg～60μg，采用pH4～7的IPG胶条进行第一向等电聚焦，硝酸银染色。获得了良好的双向凝胶电泳图谱。在花序发育初期的2-DE图谱上获得了275个差异蛋白质点，在花序发育过程中的2-DE图谱上获得了197个差异蛋白质点，在花器官发育时期的2-DE图谱上获得了135个差异蛋白质点，结果分析表明，这些差异蛋白多是低分子量蛋白，可能分别与花分生组织分化，花丝和花药等花器官的分化形成相关。