越橘离体培养诱导多倍体技术研究

本试验通过秋水仙素对越橘组培苗和愈伤组织诱变、越橘花药离体培养以及离体培养材料后代倍性鉴定，研究了越橘离体培养诱导多倍体技术，获得了倍性嵌合体后代，为培育越橘多倍体新品种奠定了基础。主要研究结果如下： 1．通过人工诱变手段首次对离体培养越橘多倍体诱导方法进行了研究。‘美登’、‘达柔’和‘埃利奥特’3个品种离体叶片在附加不同浓度ZT、2，4-D和CPPU的WPM培养基中，均有效地诱导出愈伤组织。其中‘埃利奥特’在WPM+蔗糖30mg/L+CPPU 2.0 mg/L+琼脂7 g/L的培养基中愈伤组织诱导率达90％以上，再生率达73.9％。将这3个品种的愈伤组织经0％-0.2％秋水仙素浸渍处理6h、12h和24h后，愈伤组织褐变死亡现象严重。‘埃利奥特’离体叶片在WPM+ZT 2.0 mg/L+COL0.002％培养基上诱导产生的愈伤组织中多倍体细胞比例占34.3％。 采用浸渍法或药剂培养基法对越橘试管苗茎段进行诱导多倍体结果表明：药剂培养基法效果不如浸渍法。用秋水仙素浸渍处理上述3个品种的单芽茎段后，试管苗的存活率和变异率与秋水仙素浓度和作用时间有关。用0.05％秋水仙素溶液浸渍处理24h时，3个品种平均存活率为42.9％，变异率5.7％。在0.1％秋水仙素溶液浸渍24h的处理中，3个品种平均存活率降低到20.9％，变异率上升到17.2％。而在0.2％秋水仙素溶液浸渍24h处理中，3个品种平均存活率和变异率又降低，均为9.9％。说明一定处理时间条件下，随着秋水仙素浓度的增加，茁的存活率下降，而变异率高低与秋水仙素溶液浓度不完全呈正相关。高浓度诱导处理也会出现变异率下降的现象。另外，品种之间对秋水仙素的敏感程度反应不一，诱导加倍效果亦不同。其中用0.1％秋水仙素溶液浸渍‘达柔’试管苗茎段24 h处理的诱变效果最好，存活率28.9％，变异率22.6％，均高于‘埃利奥特’和‘美登’。对细胞倍性鉴定结果表明，多数诱变株系为二倍体细胞和四倍体细胞共存的嵌合体，其中二倍体细胞平均占79.4％，四倍体细胞平均占20.6％。 2．首次研究了越橘花药愈伤组织诱导及培养问题。采用WPM+BA 0.5 mg/L+2，4-D 1.0mg/L培养基成功地诱导出了6个越橘品种花药愈伤组织。其中‘北卫’花药愈伤组织诱导率最高，达18.0％。而单独使用ZT 1.0-4.0mg/L或CPPU 1.0-4.0 mg/L对越橘花药脱分化不起作用。检测结果表明诱导出的花药愈伤组织为单倍体、二倍体和四倍体的嵌合体。花药愈伤组织在分化培养基上均未获得再分化植株。 3．对离体培养几十代至百代的‘北陆’和‘蓝丰’越橘组培苗倍性鉴定及其在