乙型肝炎病毒核心抗原在HepG2细胞膜表达的实验研究

目的制备乙型肝炎病毒(hepatitis B virus ,HBV)c基因和编码转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)不被裂解的内部信号-锚定序列基因的融合基因,将带有此融合基因的质粒转染人肝肿瘤细胞株(Human hepatocellular liver carcinoma cell line, HepG2)细胞,观察带有疏水段的HBcAg在细胞膜上的表达情况,探讨HBcAg能否通过获得疏水段实现膜表达,以及膜表达的HBcAg是造成慢性乙型肝炎患者肝细胞损害时靶抗原的可能性,为研究慢性乙型肝炎的发病机制提供实验室依据,为进一步的免疫学实验提供细胞模型。 方法1.扩增质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg;2.通过重叠序列引物的设计与多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术将编码TfR不被裂解的内部信号-锚定序列的60个碱基对(base pair,bp)加到质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg中C基因区5’端;3.利用融合基因上、下游的酶切位点,将融合基因与PCDB连接,构建质粒PCDB -Tfr -HBcAg;4.质粒PCDB -Tfr -HBcAg转染HepG2细胞;5.间接免疫荧光法,荧光显微镜下观察Tfr–HBcAg基因在HepG2细胞膜上表达情况。 结果成功构建质粒PCDB -Tfr -HBcAg,转染后观察到HepG2细胞膜上出现绿色荧光。 结论证实获得疏水段(Tfr)的乙型肝炎核心抗原(Hepatitis B core Antigen,HBcAg)可以实现膜表达,为探讨HBV前C/C基因能否通过变异而实现膜表达,从而成为慢性乙型肝炎肝细胞损伤的靶抗原提供有力的实验室依据。