高血压主要通过促进动脉粥样硬化形成引起肾组织缺血性病变以及通过肾小球高压力、高灌注和高滤过导致肾脏损害。醛固酮(aldosterone,ALD)是高血压引起肾损害的因素之一,与其受体结合后,通过血流动力学和直接的细胞学效应发挥致纤维化的作用。目前认为足细胞裂孔隔膜的分子结构和功能是维持肾小球滤过屏障的主要因素,CD2相关蛋白(CD2 associated protein,CD2AP)为其中重要蛋白之一,实验发现CD2AP缺乏可造成肾小球硬化。实验显示CD2AP在小鼠肾脏中主要表达于足突细胞、近端小管、远端小管和集合管等。目前对高血压CD2AP和肾脏纤维化相关性尚不明了。国外一些实验发现,醛固酮在足细胞相关蛋白的表达中具有一定影响,这些实验主要针对nephrin和podocin等,而缺乏醛固酮与CD2AP有关的实验。依普利酮是新开发的具有高选择性的醛固酮受体拮抗药,不仅可以降低血压,还可以对抗醛固酮的致器官纤维化作用。目前国内关于螺内酯抑制肾脏纤维化的实验较多,但对于依普利酮抑制肾脏纤维化的相关实验较少见。
研究目的
1、观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)血浆与组织醛固酮水平和肾脏纤维化与足细胞相关蛋白CD2AP水平的关系。
2、观察SHRs肾小球与肾小管间质CD2AP蛋白水平和肾脏纤维化之间的关系。
3、观察应用大剂量醛固酮受体拮抗剂依普利酮(100mg/Kg体重·日)对SHRs血压与醛固酮的影响和对肾脏的保护作用。
材料与方法
22只16周龄雄性SHRs,随机分成干预组和未干预组,每组各11只,12只同龄WKY(Wistar-Kyoto)大鼠为对照组。每天给予干预组SHRs依普利酮悬浊液灌胃(按100mg/kg,溶于2ml过滤水中),给予未干预组和对照组SHRs同体积过滤水灌胃。采用Tail-cuff测量大鼠尾动脉收缩压和舒张压。留取血标本,测定血肌酐、尿素氮、尿酸和醛固酮。在第10周末处死大鼠,将肾脏标本制备成组织匀浆,测定肾组织醛固酮。应用免疫组化方法检测肾脏组织CD2AP蛋白及转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)蛋白水平。行HE及Masson染色,检测肾脏病理切片并进行评分,观察肾脏纤维化的改变程度。
SHRs收缩压、舒张压和平均压明显高于对照组(P<0.01),而未干预组SHRs明显高于干预组(P<0.01)。干预组SHRs血清肌酐、尿素氮水平和未干预组与对照组无差异(P>0.05)。干预组SHRs血浆和肾组织醛固酮水平高于对照组(P<0.05),未干预组SHRs肾组织醛固酮水平和对照组无差异(P>0.05)。未干预组SHRs肾小球和肾小管间质Masson染色显示明显的胶原纤维增生,肾小管间质HE染色可见小管扩张、间质纤维化、炎性细胞和管型。干预组SHRs肾小球胶原纤维含量明显低于未干预组和对照组(P<0.01),干预组和对照组肾小管间质评分低于未干预组(P<0.05)。干预组和对照组SHRs的TGF—β1蛋白水平明显低于未干预组(P<0.01),而CD2AP蛋白水平明显高于未干预组(P<0.01)。SHRs肾小球与肾小管间质CD2AP蛋白水平和尿素氮、肌酐与尿酸无相关性(P>0.05),和其对应的TGF-β1蛋白水平、肾小球胶原纤维含量与肾小管间质评分呈显著负相关(r=-0.894、-0.921、-0.798和-0.532,P<0.01)。未干预组SHRs的肾脏组织醛固酮和对照组无差异(P>0.05)。
结论
1.中年龄SHRs的血浆醛固酮水平增高;
2.SHRs肾脏纤维化程度随血浆醛固酮水平升高而加重,表示血浆醛固酮在肾脏纤维化过程中发挥着重要的促进作用;
3.大鼠血浆醛固酮水平与肾脏CD2AP蛋白水平呈负相关,表示血浆醛固酮水平的增高可能是CD2AP表达水平降低和足细胞损伤的原因之一;
4.SHRs肾小球与肾小管间质CD2AP蛋白水平和肾脏纤维化呈显著负相关,表示肾小球及肾小管间质CD2AP蛋白水平降低,能加重肾脏纤维化进展;
5.依普利酮可以降低中年SHRs收缩压、舒张压及平均压,并且能够改善肾脏纤维化程度,此作用是独立于降压作用之外的;
6.肾脏组织醛固酮在中年龄SHRs不表现增高,其原因尚待阐明。
