黄皮（Clausena lansium Lour.）种质资源的ISSR分析

黄皮(Clausena lansium Lour.)Skeels属芸香科黄皮属,原产于我国南部,目前世界上发现黄皮属约有30多个种,在我国约有11个种,主要分布于福建、广东、广西、海南等省,是我国南方重要特产水果之一,已有1 500多年的栽培历史。广东和广西已经开展了相关的基础性研究,主要集中在栽培、管理、生理、形态及细胞学等方面,但从分子生物学方面进行研究的相对较少,对现有的资源遗传多样性及种质鉴定工作还缺乏系统的研究。 本研究在开展黄皮栽培品种资源的调查基础上,运用ISSR分子标记,研究了40份黄皮材料的遗传多样性,为黄皮种质资源的有效保护和合理利用提供科学依据,为黄皮新品种的培育提供遗传背景。主要研究结果如下: 1.针对黄皮富含酚类化合物和多糖等物质导致DNA提取和纯化困难的问题,采用经过改良的SDS法提取的黄皮DNA,不论从数量还是纯度上均可满足ISSR分析要求,摸索提出了合适的黄皮DNA提取方法。 2.研究建立了黄皮ISSR-PCR反应的技术体系。在20μL的反应体系中,TaqDNA聚合酶的用量为1.5 U,引物浓度为0.4μmol/L,dNTP的浓度为300μmol/L,模板DNA浓度为30 ng/反应,10×Buffer 2μL。按照此体系,在94℃预变性5 min,94℃变性30 s,在最适退火温度下退火60 s,72℃延伸90 s,进行40个循环,循环结束后72℃延伸10 min。该体系扩增出的条带清晰,效果良好,能够满足ISSR分析。 3.从96个引物中筛选出15个ISSR引物,对40份黄皮材料进行了ISSR分析。共扩增出165条带,其中多态性为100条,多态性百分率为60.6%。同时研究中发现含(AG)n、(GA)n序列的ISSR引物在黄皮上扩增的多态性水平较高,说明黄皮基因组中(TC)n/(CT)n含量丰富。 4.依据ISSR分析结果,对供试的40个品种进行聚类分析,结果表明:它们之间的遗传相似系数在0.714-1.000之间,揭示了不同省(区)地方性黄皮品种之间遗传多样性、遗传相似性与亲缘关系,进一步明晰了品种间的遗传距离。为以后更有目的、有选择的引种、育种,缩短育种年限,提高育种效率奠定了一定的理论基础。