茯苓多糖提取纯化及指纹图谱研究

茯苓是一种担子菌纲非褶菌目多孔菌科的真菌,外形有菌丝体和菌核两部分。其菌核寄生于红松、马尾松根部。茯苓还是中国和一些亚洲国家的传统中药材,其应用至今已有2000多年历史。在我国200多个传统中医精华方剂中,含有茯苓的就占了1/5,可以说是中药常用成分。而茯苓多糖为茯苓的主要成分,具有抗炎、抗肿瘤和抗衰老等多种活性。本论文主要研究其水溶性多糖的提取工艺、分离纯化及质量控制方法。 在提取工艺研究中,主要考虑了浸提水溶液温度、料水比和浸提时间对多糖得率的影响,首先进行单因素试验,确定单因素的水平范围,并在此基础上采用正交实验进行分析,以获得最佳的粗多糖浸提工艺参数。然后采用中心组合设计进行放大试验,经统计回归分析得到茯苓粗多糖的优化提取工艺参数:料水比为1:9.4,浸提温度90℃,沉淀时酒精浓度70%,提取时间7.4小时左右。 分离纯化从醇沉物入手。首先对比研究了Sevag法、木瓜蛋白酶法、及二者结合脱除蛋白质的效果。试验结果表明:综合考虑蛋白质的脱除效果和多糖的损失,三种方法中酶法结合Sevag法较优,蛋白质脱除45.5%,多糖损失34.3%。然后利用超滤法对醇沉得到的粗多糖进行了进一步分离纯化,得到纯度较高的水溶性茯苓多糖。 为对茯苓多糖的质量进行有效的控制,本文利用超滤法和高效液相色谱法,对三种不同产地的茯苓(广西茯苓、云南茯苓、湖南茯苓)进行了研究,建立了基于多糖的二元指纹图谱的工艺流程和分析方法。本方法首先对提取得到的多糖用三氟乙酸水解,随后由水解得到的单糖通过PMP进行衍生,然后由高效液相色谱分析得到基于茯苓多糖的指纹图谱,最后利用夹角余弦法计算相似性。以广西茯苓为基准计算时,湖南和云南茯苓与其相似性分别为0.9190,0.7400。该计算结果表明,基于碳水化合物信息融合的多元指纹图谱方法可以有效的对不同产地的茯苓进行筛选,是一种有效的中药多糖质量控制的方法。