长白山柳属植物大黄柳黄酮成分及促进脂肪分解活性研究

大黄柳（Salix Raddeana Laksh）系杨柳科柳属植物Salicaceae salix L．黄花柳组Vetrix Dum．植物。主要分布于东北地区吉林省长白山地区和黑龙江省小兴安岭地区，植物学特征不同于普通柳属植物，喜阳长于半山坡，春季4月开黄花，其叶呈宽椭圆形，叶对生，背部有白色绒毛。当地民间采其叶做药用，主要用大黄柳树叶治疗口腔溃疡和皮疹等。柳属植物普遍含有黄酮类化合物。已发现的黄酮类化合物主要有黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮醇类、双黄酮及黄烷醇类等。研究中所采用的分离方法有：有机溶剂浸提、系统溶剂萃取法、柱层析（如聚酰胺柱层析、硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析）、高效液相色谱法（HPLC）、纸层析、薄层层析法等；化学成分结构鉴定方法有核磁共振法(1HNMR和13CNMR)、质谱法（MS）、紫外分光光度法（UV）、红外分光光度法（IR）等。柳属植物的主要药理作用有降压作用、抗血栓、抗动脉硬化、对心血管系统的作用、消肿散解、消热解毒、祛风利湿的作用。 本研究以长白山特有的柳属植物大黄柳叶为原料，利用生物活性跟踪实验研究大黄柳叶中具有抑制脂肪分解活性的黄酮类成分。利用医用酒精为提取溶媒，微波提取，乙醇提取物用系统溶剂法萃取，分别用石油醚，乙醚，氯仿，正丁醇萃取，将正丁醇萃取相过大孔树脂，用10％，30％，50％乙醇洗脱、根据薄层层析检测结果，将30％乙醇流份上聚酰胺、葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）进行柱层析，分别用不同浓度的乙醇和甲醇为洗脱溶剂，聚酰胺柱30％和40％乙醇流份回收溶剂后静置得浅黄色絮状沉淀1和浅黄色颗粒状沉淀2，分别用无水乙醇重结晶，得化合物1和2。将沉淀过滤后上清液冻干，溶于甲醇中并利用制备型高效液相色谱法进行分离纯化，分离柱为半制备柱Zorbax SB C18（9.4×250mm，5μ），流动相为甲醇：水（40：60；38：62；36：64），进样量为1mL,进样浓度为10mg/mL，流速为4.0mL/min。50％和60％的乙醇流份上葡聚糖凝胶柱（Sephadex LH-20），用甲醇洗脱。 总共分离得到了12种单体化合物，其中9种化合物经化学反应、理化常数测定及波谱解析（紫外光谱，红外光谱，质谱，核磁共振）确定它们的化学结构均为黄酮化合物，分别为地奥亭7-O-α—L-吡喃阿拉伯糖（1→6）β-D吡喃葡萄糖苷（1）(130.2mg)，地奥亭7-O-β-D-吡喃木糖（1→6）β-D吡喃葡萄糖苷（2）(78.5mg)，木樨草素7-O-α-L-吡喃阿拉伯糖（1→6）β-D-吡喃葡萄糖苷（3）(12.5mg)，木樨草素7-O-β-D-吡喃木糖（1→6）β-D-吡喃葡萄糖苷（4）(14.8mg)， 吉林农业大学博士学位论文 长白山柳属植物大黄柳黄酮成分及降脂活性研究 山奈酚3一。一芸香糖普（5）(897mg)，山奈酚3一。一口一D毗喃葡萄糖普（6） （120.6mg），料皮素3一O一口一D叶匕喃葡萄糖普（7）(一24.5mg)，，料皮素3一。一p一。- 毗喃半乳糖普（8）(24.2mg)和褂皮素3一。一芸香糖普（9）(86.2mg)。其中化合 物（1）地奥亭7一O一Q一L一毗喃阿拉伯糖（l*6）口一D毗喃葡萄糖普和化合物（2） 地奥亭7一。一日一D一毗喃木糖（l*6）口一D毗喃葡萄糖普为首次天然界得到的新黄 酮化合物，化合物（3）木裤草素7一。一a一L一毗喃阿拉伯糖（1、6）p一D一咄喃葡萄糖 普和化合物（4）木裤草素7一O一p一D一毗喃木糖（l*6）p一D一毗喃葡萄糖普为首次在 柳属植物中获得的黄酮化合物，这种9种黄酮化合物均为首次在大黄柳叶中分 得。 化合物1和2的理化性质:浅黄色粉末，m:P 243一245℃，可部分溶于甲醇， 难溶于乙醇，易溶于含水甲醇.盐酸一镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性。谱 学特征为:uv腼ax（MeoH）nm:254，345。IR（KBr）em一’:3520，3450，1650，1605，1590， 一495，2 435，830。HR队B一MsM一’耐z:593一525（e27H300，5计算值:539.1511）， EsIMs而z:594。结合其’洲MR（sooMHz一nMso一d6）和’3eNMR（nMso一d6）数据， 最后确定其化学结构为地奥亭7一O一a一L一毗喃阿拉伯糖（l*6）一口一D毗喃葡萄 糖普和地奥亭7一。一口一D一毗喃木糖（l*6）一口一D毗喃葡萄糖普。 本文研究了大黄柳叶提取物及单体化合物对脂肪分解的促进作用。在脂肪分解 活性测定中发现，乙醇提取物及不同萃取部位均不阻碍胰脂肪酶的活性，但均有 促进去甲肾上腺素诱导的脂肪分解反应。药理活性研究结果表明，比较对照组， 乙醇提取物的正丁醇苹取相、正丁醇萃取相过聚酞胺柱4004乙醇洗脱液增益去甲 肾上腺素诱导的脂肪分解活性最明显。这说明正丁醇相中含有活性物质，并且主 要集中在过聚酞胺柱40%乙醇洗脱液，因此本研究重点研究大黄柳叶乙醇提取物 正丁醇苹取相。 大黄柳叶提取物抑制了小鼠体重和子宫周围脂肪组织增加和肝脏中甘油三 醋的积累.与高脂肪组相比，高脂肪组+2%大黄柳叶提取物和高脂肪组+5% 大黄柳叶提取物的小鼠在开始实验11天到饲育结束前3天其粪便排泄量明显 增加，粪便中的脂质含量也明显增加，这些结果显示，大黄柳叶提取物具有促进 脂肪分解的作用并阻碍脂肪酸吸收的作用.此外大黄柳叶提取物能加快甘油三醋 的分解。大黄柳叶提取物浓度为0.smg/mL时，小肠刷状缘囊对脂肪酸的吸收得 到抑制，说明大黄柳叶提取物有抑制脂肪吸收的作用。