湿热型类风湿关节炎患者肠道微生态特点及清热活血法对其影响初探

研究目的:本研究基于中医“辨证论治”思想的基础上,收集RA不同证型患者临床资料以及利用高通量测序技术分析RA不同证型患者组与健康人组的肠道菌群结构,探讨湿热型类风湿关节炎患者肠道微生态特点;通过观察清热活血方+MTX组与MTX组治疗湿热型RA患者6个月的疗效,并且利用高通量测序技术分析两治疗组疗前疗后的肠道菌群结构,初步探讨清热活血方对湿热型RA患者肠道菌群影响变化,为临床应用清热活血方提供科学依据,寻求中医药治疗RA的新的突破口。研究方法:本课题纳入于2019年10月—2020年8月期间于广安门医院门诊部和301医院就诊及治疗的类风湿关节炎患者以及健康志愿者,根据中西医纳入标准入组湿热组、非湿热组、健康对照组;湿热组分为清热活血方+MTX组,MTX组。收集各组人群一般临床资料,建立数据库,并利用SPSS 24.0软件进行分析,收集各组人群粪便并通过16s rDNA高通量测序技术,建立数据库,分析其α多样性、β多样性、肠道菌群组成结构,一方面比较RA湿热证与非湿热证以及健康人菌群特点,另一方面比较清热活血方+MTX组、MTX组治疗前后菌群特点。研究结果:1.基本情况:本研究共纳入14例健康志愿者以及38例类风湿关节炎患者,其中湿热痹阻证28例,非湿热痹阻证10例。湿热组在分为清热活血方+MTX组以及MTX组,人数分别为15例与13例,入组志愿者性别与年龄比较无统计学差异。所有样本测序总序列量为73756±5494.59tags,有效序列为65710±8285.88tags,有效最短序列为222bp,有效最长序列为453bp,平均序列长度均在440bp以上。不同分组间OTU种类不同,差异有统计学意义。测序深度合理,样本量足够,各组之间物种丰富度与分布情况不同。各组间样本组成有差异,组内样本有相似性。湿热证RA患者肠道菌群结构特点:在门水平上:所有RA患者的Bacteroidetes（拟杆菌门）较健康志愿者组水平降低,湿热组降低更明显;湿热组较对照组、非湿热组的Fusobacteria相对丰度明显升高,在属水平上:湿热组、非湿热组、正常人组的差异菌群较多,例如Proteus（变形杆菌属）、Prevotella（普雷沃氏菌属）、Leptotrichia（纤毛菌属）等多种菌群丰度在三组组间差别有意义,其中湿热组患者菌群样本中Prevotella（普雷沃氏菌属）、Fusobacteriia（梭杆菌属）、Ruminiclostridium5（瘤胃梭菌属）、CoriobacteriaceaeUCG-002（红蝽杆菌属）高于非湿热组和正常人组。Prevotellaceae NK3B31group为非湿热组优势菌群之一。清热活血方对湿热证RA患者影响变化:清热活血方+MTX与MTX组可以降低ESR、CRP等外周血炎症指标水平,改善疾病活动度指标,降低DAS28指数,且清热活血方+MTX治疗效果好于单用MTX组,不良反应发生几率低于单用MTX组,说明应用清热活血方可以提高治疗效果。在门水平上,经过清热活血方+MTX组与MTX组治疗后,厚壁菌门比例下降、拟杆菌门比例上升,两个疗后组在门水平来看,菌群丰度无统计学意义。在属水平上,清热活血方+MTX组的治疗后丰度升高的有Faecalibaculum（粪杆菌属）、Dubosiella、Mucispirillum 等等菌属,丰度降低的有 Ruminiclostridium5（瘤胃梭菌属）、Prevotella（普雷沃氏菌属）、PrevotellaceaeNK3B31group、LachnospiraceaeUCG-003（毛螺旋菌属）、Peptoniphilus、Sneathia 等等菌属。MTX 治疗后丰度升高的有Ruminococcus2（瘤胃球菌属2）,丰度降低的有Roseburia（罗斯氏菌属）、Veillonella（韦荣氏球菌属）、Lachnospira（毛螺菌属）。属水平上中西药疗后组较西药疗后组差异菌群较明显的有Faecalibaculum、Prevotella等等。研究结论:1.清热活血方可以有效降低ESR、CRP等外周血炎症指标水平,改善疾病活动度指标,并且安全合理。2.不同证型的RA患者肠道菌群组成并不相同,湿热型RA患者与其他证型患者以及健康志愿者的菌群组成有差异,有其特有的菌群改变。3.清热活血方可以调节湿热型RA患者肠道菌群结构,增加物种丰富度,使物种分布更加合理,治疗后RA患者菌群组成更接近正常人。