重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的实验研究

重楼(Rhizoma Paridis),又称七叶一枝花,是百合科重楼属植物的泛称,以蚤休之名首载于《神农本草经》。中药重楼是重楼属植物的干燥根茎,主要分布在我国西南各省,它的药用历史悠久,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊等功效。用于痈疮、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽搐等症。近年来随着研究的深入,重楼的药用价值日益被重视。但目前对重楼属植物的研究报道不多,主要集中在资源、生药学和化学及药理学等方面。 目的：研究从重楼植物中提取的活性成分重楼皂苷Ⅰ,观察其体外抗肝癌细胞Bel-7402增殖的效果并初步探讨其可能的相关作用机制。 方法：以不同浓度的重楼皂苷Ⅰ作用于肝癌细胞Bel-7402,不同时间后用MTT比色法检测细胞增殖程度；光镜下观察药物作用后细胞形态的变化；以1.25μg/ml的重楼皂苷Ⅰ处理肝癌Bel-7402细胞,经碘化丙啶(PI)染色后应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况；DNA凝胶电泳观察细胞凋亡情况；运用免疫细胞化学染色检测药物作用后肝癌细胞Bel-7402的Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况。 结果：重楼皂苷Ⅰ在0.3125-5μg/ml浓度范围内对Bel-7402细胞的增殖均有抑制作用,并呈现出明显的时间剂量依赖效应关系。重楼皂苷Ⅰ能诱导肿瘤细胞凋亡,流式检测在浓度为1.25μg/ml作用12h、24h、48h后,均可出现明显的凋亡峰,作用时间越长,凋亡率越高；DNA凝胶电泳可见DNA断裂片段明显增多；浓度为1.25μg/ml的重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞Bel-7402作用24h后凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达均增加,而Bcl-2蛋白下降。 结论：重楼皂苷Ⅰ能抑制Bel-7402细胞增殖并能诱导其凋亡；并能上调Bax、Caspase-3蛋白、下调Bcl-2蛋白；重楼皂苷Ⅰ可能是通过影响Bax、Bcl-2蛋白的表达从而激活Caspase-3通路发挥抗肿瘤作用的。