miR-29c通过抑制VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌PC3细胞凋亡

第一部分VEGF和VEGFR2在前列腺癌中的表达及相关性目的收集临床组织标本研究血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-VEGFR2)的表达及与前列腺癌分级分期的关系。方法收集35例经病理诊断为前列腺癌的组织标本和18例癌组织标本,免疫组织化学技术(IHC)检测VEGF和p-VEGFR2的表达,显微镜下观察并拍照,采用IPP6.0软件进行图像分析并计算平均光密度值。统计学分析VEGF和p-VEGFR2在前列腺癌中的表达及与临床病理参数的关系和相关性。结果VEGF及p-VEGFR2在前列腺癌组织中表达量显著高于对应癌旁正常前列腺组织(p<0.01)。VEGF及p-VEGFR2蛋白表达水平与前列腺癌病理分期有关(P<0.01)但与病理分级无关(P>0.05);统计学分析显示VEGF与p-VEGFR2的表达量呈正相关性(r=0.865,p<0.01)。结论VEGF及p-VEGFR2在前列腺癌中高表达且密切相关,为进一步探讨两者在前列腺癌发生发展中的作用提供理论依据。第二部分mi R-29c,VEGF和p-VEGFR2在正常前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞PC3中的表达目的检测正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)与前列腺癌细胞(PC3)中mi R-29c,VEGF和p-VEGFR2表达情况。方法常规培养RWPE-1及PC3细胞株,24h后分别提取两种细胞RNA与蛋白质。Q-PCR检测mi R-29c,VEGF,VEGFR2的表达,Western-Blot检测VEGF,VEGFR2,p-VEGFR2的表达。结果与RWPE-1相比PC3细胞中mi R-29c的表达显著降低,VEGF,VEGFR2及p-VEGFR2的表达显著升高,差异具有统计学意义(p<0.01).结论PC3细胞中mi R-29c,VEGF,VEGFR2的表达与RWPE-1中存在显著差异,为后续实验奠定了基础。第三部分mi R-29c下调VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌细胞凋亡目的研究过表达mi R-29c在前列腺癌细胞中对VEGF/VEGFR2信号通路的调节作用及其对细胞凋亡的影响。方法生物信息学软件预测mi R-29c与VEGF的靶向结合区域;Western-Blot检测过表达mi R-29c后PC3细胞VEGF,VEGFR2和p-VEGFR2及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况;细胞免疫荧光(IF)检测p-VEGFR2在PC3细胞中的定位;hoechst 33258染色法检测PC3细胞凋亡,流式细胞术(FCM)检测PC3细胞早期凋亡率。统计学方法分析实验结果。结果PC3细胞过表达mi R-29c显著降低VEGF,p-VEGFR2,Bcl-2的蛋白表达(p<0.01),Bax的表达显著升高(p<0.001),细胞凋亡与早期凋亡率显著增加(p<0.001)。细胞免疫荧光结果显示p-VEGFR2广泛存在于PC3细胞的细胞膜,细胞质及细胞核中。结论过表达mi R-29c能够靶向降解VEGF的表达从而降低p-VEGFR2进而促进前列腺癌PC3细胞株的凋亡。