血浆中的MicroRNA在肝损伤性疾病检测中的应用

肝脏是人体内最大的实质器官结构,功能复杂,易受多种病原体、毒物及免疫病理累及,肝脏疾病成为人类发病和死亡的常见原因之一。已知多种致病原因可导致肝损伤,如病毒性肝炎、酒精性肝炎和药物性肝炎等。各种有害因素所致的肝损伤可表现为肝坏死、脂肪肝、胆汁郁积、肝纤维化、肝硬化及肝癌等。对肝损伤的防治目前仍是一个全球性的严峻课题。 实验室诊断水平对于肝脏疾病的预防、诊断和治疗具有不可替代的关键作用。高灵敏度、高通量的快速筛查技术,有利于及时发现传染源、切断传播途径,促进预防和控制蔓延。广泛的研究主要集中在寻找诊断肝损伤更加有效的外周血中的分子标记物上,但是临床实践方面似乎进展不大。血浆中的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)是目前为止作为肝脏损伤诊断指标应用最多的分子标记物。我们知道,血清AST水平在很多临床疾病中都有升高,与之相比,ALT水平的升高经常被认为是肝细胞坏死的特异性诊断指标。但是,随着对疾病的认识及实验室检测水平的提高,我们逐渐认识到ALT不应该被认为是一种肝脏特异性的生物标记物。因为在其他条件下,血清中的ALT也会有升高,主要发生在骨骼肌损伤、甲状腺机能减退以及肌炎等疾病。这些原因使得基于ALT水平的肝脏相关疾病的鉴别诊断变得有些困难。另外,在临床应用中,ALT水平通常与肝脏组织病理学变化相关性不好。‘所以,很多研究聚焦于寻找一个更加特异和可靠的分子生物标记物作为ALT的补充或替代进行肝脏损伤疾病的诊断。然而目前还没有找到一种比ALT或AST更合适的生物标记物。 microRNAs (miRNAs)是大小约21-23个碱基的非编码单链小分子RNA,通过与靶基因3’端非翻译区(3'-UTR)的不完全碱基配对发挥基因调控作用,使mRNA降解或抑制靶mRNA翻译。miRNAs广泛参与了生物体多种生理和病理过程,包括细胞增殖、凋亡、应激反应和肿瘤生成等等。通过表达量的上调或者下调影响细胞发育和疾病进程。一些miRNAs在细胞或组织中特异性表达,所以组织型中miRNAs的表达量变化可能与某些疾病类型相关。有关miRNAs的研究主要集中在肿瘤方面,认为组织特异性miRNAs是一种新的与肿瘤分型和预测相关的分子。 最近有报道指出外周血循环中的miRNAs可以被用作诊断肿瘤的非侵袭性生物标记物。miRNAs在血浆和血清中非常稳定,不受RNA裂解酶(RNases)影响,在长期储存或反复冻融等情况下仍能保持稳定,健康人的血浆和血清当中,miRNAs表达量相对很稳定。这些特点表明可以开发血循环中肿瘤来源的miRNAs作为生物标记物。随着检测技术方法不断进步,循环miRNAs的应用研究有了实质性进展,在肿瘤诊断和预后、产前诊断等领域都取得了一些重要成果。 我们的研究主要集中在血浆中的miRNAs是否也可以被特异性的用作诊断肝脏损伤性疾病。在此项研究中,共有103名慢性乙肝患者和15名肌肉损伤患者的外周血作为研究样本。这些患者和健康对照者血浆当中的miRNAs表达谱使用Real-timePCR方法检测。另外,我们也建立了两种小鼠肝损伤模型(药物性肝损伤和酒精性肝损伤模型),来评价在不同的肝损伤类型中,是否也有这种差异性的miRNA表达。参照其他文献报道,我们一共选择了9个miRNAs,其中miR-122无论在患者还是小鼠模型中,其表达量的改变都是最明显的。与血浆中ALT活性相比较,可以更早的检测到miR-122的表达量改变,而且这种改变也更加可靠,更加具有肝脏特异性,与肝脏的组织病理学改变吻合度也较高。