慢性乙肝肝胆湿热证的蛋白质组学研究及清肝利湿汤干预

目的: 1.观察清肝利湿汤(QGLS)干预慢性乙型肝炎(ChronicHepatitis,CHB)患者前后PBMC的差异蛋白质表达,探讨QGLS治疗CHB的作用及机制。 2.通过建立正常人及CHB患者外周血单核细胞(PBMC)蛋白质的双向凝胶电泳图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找与CHB疾病相关蛋白,探讨CHB的致病机制。 方法: 1.将肝胆湿热型慢性乙肝患者40例随机分为2组,分别予中药清肝利湿汤和西药拉米夫定治疗,用药3个月后观察临床疗效。 2.利用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离来源20例正常人及20例CHB肝胆湿热型患者用清肝利湿汤治疗前后的外周静脉血单个核细胞(PBMC),用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对用清肝利湿汤治疗前后的差异蛋白质进行测定肽质量指纹谱,检索MSDB和Swiss-Prot蛋白质数据库鉴定差异蛋白。 结果: 1.临床观察:中药清肝利湿汤治疗肝胆湿热型慢性乙肝其临床疗效和西药拉米夫定无显著差异(P＞0.05),在证候改善方面优于西药组(P＜0.05)。 2.各组PBMC总蛋白2-DE图谱的建立及差异蛋白质识别:分别获得正常人、CHB患者治疗前、后PBMC总蛋白2-DE图谱。健康对照组的蛋白质点总数为980±28个,肝胆湿热证组960±21个,清肝利湿汤组997±15个,经过背景消减后,分别将健康对照组作为参考胶进行3块胶间的蛋白质点的匹配,结果得到健康对照组的平均匹配点数为816±65个,肝胆湿热证组844±87,清肝利湿汤组817±55,其平均匹配率分别为85%,88%,82%。 3.差异蛋白质点质谱鉴定及蛋白功能分类:发现并鉴定了正常人、CHB患者治疗前、治疗后BPMC中的差异表达大于2倍的蛋白质点19个。分别为细胞内结构与细胞生长相关蛋白(如热休克蛋白70),凝血相关蛋白(如β-血小板球蛋白前体,血小板碱性蛋白前体),参与信号转导途径的相关蛋白(如肌动蛋白的细胞骨架,Transgelin-2)及假定蛋白等。 结论: 1.清肝利湿汤改善了慢性乙肝肝胆湿热证患者的症状与体征,有效的抑制乙肝病毒的复制,临床疗效好。 2.初步建立了慢性乙型肝炎肝胆湿热证、清肝利湿汤干预后及健康对照外周血单个核细胞蛋白质表达图谱。 3.初步鉴定了19个与慢性乙型肝炎肝胆湿热证相关差异蛋白,为研究肝胆湿热证肝炎的发病机制的研究奠定了基础。19个蛋白质点在清肝利湿汤治疗前后的差异表达,有可能是清肝利湿汤的作用靶点,为研究清肝利湿汤的作用机制奠定了基础。