中药多糖的免疫增强活性及其对抗体生成影响的研究

为筛选新型免疫增强剂,并研究其在临床上的应用,用水提醇沉法从传统中草药板蓝根、黄芪、山药和牛膝中提取和制备了板蓝根多糖、黄芪多糖、山药多糖和牛膝多糖,采用体内试验与体外试验相结合的方法,研究了4种多糖对特异性免疫因素和非特异性免疫因素的影响,并通过动物试验比较了它们各自在临床应用时的免疫增强效果,试验成功地筛选出了免疫增强活性较好的中药多糖及其剂量,作为低毒、高效的新型免疫增强剂,以便为这些中药多糖作为畜禽免疫增强剂,尤其猪用免疫增强剂提供理论和临床依据。试验分为5部分,如下所述: 试验1本试验用水提醇沉法从板蓝根、山药、黄芪和牛膝中提取和制备了板蓝根多糖、黄芪多糖、山药多糖和牛膝多糖,并用硫酸葸酮比色法测定了其含量。4种中药多糖的净含量分别为:板蓝根多糖,58%;山药多糖,73%;黄芪多糖,65%;牛膝多糖,54%。以此作为后面试验的材料,为整个试验研究打下了基础。 试验2为从板蓝根多糖、山药多糖、黄芪多糖和牛膝多糖中初步筛选免疫活性较好的中药多糖,用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素和溶血空斑形成试验,观察了4种多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素和溶血空斑形成的影响。结果表明,4种多糖均能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,与对照组比较差异显著(P＜0.05和P＜0.01),能使小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能加强,从而加强机体的非特异性免疫作用;4种多糖也能显著提高小鼠血清溶血素含量和凝集素水平,与对照组比有极显著性差异(P＜0.01),说明这些多糖均能较好地提高小鼠的体液免疫水平,促进抗体的生成。 试验3为筛选免疫活性较好的中药多糖和研制新型猪用免疫增强剂,用MTT比色法比较了不同浓度的板蓝根多糖、牛膝多糖、山药多糖和黄芪多糖对猪脾脏淋巴细胞增殖的影响。结果表明,IRPS,ABPS,CYPS,APS均能显著刺激ConA或LPS诱导的猪脾淋巴细胞增殖(p＜0.05),且4种多糖促进猪脾淋巴细胞增殖的作用与多糖浓度有关。 试验4为选择具有免疫增强活性的中药多糖及其最佳作用剂量,用淋巴细胞转化试验测定了不同浓度的板蓝根多糖、黄芪多糖、山药多糖和牛膝多糖对体外培养猪脾脏淋巴细胞增殖功能的影响。结果表明,IRPS,APS,CYPS,ABPS均能显著地直接或协同LPS,ConA诱导的猪脾脏淋巴细胞增殖(P＜0.05);4种多糖促进猪脾脏淋巴细胞增殖的作用与多糖浓度密切相关,且不同多糖促进淋巴细胞增殖的最佳剂量不同。 试验5为研究免疫增强剂在临床上的应用,用板蓝根多糖、黄芪多糖、山药多糖和牛膝多糖在PRRSV灭活疫苗免疫小猪后,将高、低剂量的4种中药多糖,一天一次,连续3天分别皮下注射,然后用ELISA试剂盒检测血清中的抗体水平,观察各种多糖对PRRSV灭活疫苗的免疫增强效果。结果发现,四种中药多糖的峰值抗体水平由高到低的顺序依次为IRPS＞CYPS＞APS＞ABPS,各组平均值均显著高于疫苗对照组(P＜0.05),表明IRPS、CYPS、APS和ABPS均具有明显提高猪特异性抗体的作用。 上述研究结果表明,板蓝根多糖、山药多糖、黄芪多糖和牛膝多糖能够有效地促进小鼠的免疫机能,促进猪脾淋巴细胞增殖,提高猪抗体水平,表明4种中药多糖具有非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫增强作用,从而为这些中药多糖作为畜禽免疫增强剂,尤其猪用免疫增强剂提供理论和临床依据。