山茱萸提取液制备及其抗心律失常活性研究

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸的(Comus officinalis Sieb.etZucc.)干燥成熟果肉。功能为补益肝肾，涩精固脱。主治眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱，内热消渴。近两年研究发现，山茱萸具有抗失血性休克、抑制血小板聚集、免疫调节、抗炎、降血糖、抗氧化、抗癌、抗菌等作用。 山茱萸含有环烯醚萜苷类、有机酸和挥发油等多种化学成分。据文献报道，山茱萸中马钱素(loganin)是心血管活性物质，马钱素为总苷中的主要成分和主要有效成分。 我们在研究抗失血性休克作用的预实验过程中，发现山茱萸提取液具有明显的抗心律失常活性。因此，我们对山茱萸进行系统分离，制备不同组分的提取液，考察其理化性质，建立起分析方法和质量标准。 在临床药理、药物作用机制研究方面，中药的药物代谢动力学越来越显示出其重要性和必要性。尤其是对中药有效成分的药物代谢动力学研究，了解其在体内的吸收、分布、代谢和消除一系列过程，对于指导临床合理用药将具有重要意义。 第一部分：山茱萸提取液制备工艺与质量研究 目的：研究山茱萸提取液的最佳制备工艺以及去除杂质的方法，以获得质量稳定的提取液。研究山茱萸提取液的鉴别、检查以及含量测定方法，建立质量标准，以有效控制山茱萸提取液的质量。 方法：按正交试验设计，采用水提醇沉制备山茱萸提取液，以提取液的总苷含量为指标，分别考察溶剂用量、提取时间及提取次数这三个试验因素。研究除去蛋白质、多糖和鞣质的最佳条件以及确定溶液最适pH值、活性炭和阳离子交换树脂用量。 I 中文摘要 采用系统溶剂革取法进行分离，分别制取不同组分的提取液，即 总提取液、乙醚提取液、乙酸乙酯提取液、正丁醇提取液以及提取残 余液。 采用薄层色谱法对山莱英中熊果酸 ＊rsolic acid）和马钱素 （logani）进行鉴另。 采用电位滴定法测定总有机酸什otal oTganic acids）含量，考察精 密度和稳定性试验。 研究分光光度法测定总苦Ootal glycosides）的含量。取山莱英水 提液，稀释后用大孔吸附树脂层析柱上吸附后再洗脱，用显色剂显色 后的溶液进行光谱扫描，分别与人参二醇、桅子昔、马钱素和莫诺昔 加入显色剂显色后的溶液进行光谱扫描结果比较，确定测定波长和对 照品。在此条件下，考察不同温度、不同时间对显色的影响，确定显 色温度和时间。取马钱素对照品配制成系列浓度的溶液以制备标准曲 线绘制，并进行回收率测定和稳定性考察。 高效液相色谱法狈定马钱素（loganin）和莫诺昔（morroniside）的 含量。采用PE上50型高效液相色谱仪；色谱条件为KIOm肪＊ 色谱 柱N．6XI扣mm，skin）；u40型二极管阵列紫外检测器，检测波 长分别为马钱素237urn，莫诺＃240urn；流动相为0刀smol·L”’磷酸二氢 钠缓冲液－乙睛（6．4：l）；流速0．smL·min”’。配制系列浓度的马钱素 和莫诺昔对照品溶液，绘制标准曲线。并依法测定回收率和精密厦。 分别配制对照品溶液和供试品溶液。吸取对照品溶液与供试品溶液各 10vL，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，计算供试品溶液中马钱 素和莫诺苦的含量。 结果：采用三因素三水平进行考察，最佳方案为A；B人；，仇选后 的最佳提取条件为水煮提取3次，每次2小时，水的用量为药材的8 倍。确定了提取液的制备工艺。除躁质，调整pH值和活性炭脱色，解 决了提取液的澄明度问题。采用阳离子树脂交换法除去了过量的钾离 于。 制订了总提取液的质量标准。建立总提取液的薄层色谱法门LC） 鉴别，样品液和对照品溶液在相同位置上呈显相同颜色的斑点：制订 提取液的含量测定方法，即用电位滴定法测定总有机酸，分光光度法 2 中文摘要 测定总昔，高效液相色谱法（RP－HPLC）测定马钱素和莫诺昔的含量。 采用分光光度法测定总昔，选定的测定波长为530urn。马钱素作为 对照品，测定吸收度；以吸收度对马钱素浓度作图，绘制标准曲线， 其回归万程为C二0．025＋0二14lA，，0．9999＊—5人 样品液的总昔含量 为18．40mg·InL”’，RSD为1．56％；在不同温度下和放置不同时间，考察 样品的稳定性，结果表明样品溶液在8小时内相对稳定。高、中、低三 种不同浓