紫菀、款冬花药对的药学研究

本文进行了款冬花药材质量标准、款冬花药材及紫菀款冬花药对总黄酮提取纯化工艺和指纹图谱的研究,紫菀药材质量标准、总皂苷提取纯化工艺和指纹图谱的研究。 文献研究方面,本文阐述了紫菀、款冬花及紫菀款冬花药对的中医药理论和临床应用,紫菀、款冬花化学成分及其药理国内外研究进展。 质量研究方面,《中国药典》2005年版一部收载的款冬花药材标准中仅有来源和性状项,质量标准不完善;而紫菀药材质量标准较完善。本文对它们的质量标准进一步完善。 款冬花药材质量研究:以芦丁为指标成分进行了薄层鉴别;测定了醇溶性浸出物和挥发性醚浸出物的含量;以芦丁为对照品,建立了紫外一可见分光光度法测定药材中总黄酮含量的方法及高效液相法测定药材中芦丁成分。紫菀药材质量研究:以紫菀酮为对照品,建立了紫外一可见分光光度法测定药材中脂溶性皂苷含量的方法及HPLC-ELSD检测方法测定药材中紫菀酮。 对款冬花、紫菀款冬花药对总黄酮的提取、纯化工艺进行了研究,考察了不同乙醇浓度、料液比、提取时间等单因素对总黄酮提取效果的影响,建立了四因素三水平的正交试验,最终确立了款冬花总黄酮最佳的提取工艺为:12倍量60%乙醇加热回流提取3次,每次1小时;紫菀款冬花药对总黄酮最佳的提取工艺为:10倍量80%乙醇加热回流提取3次,每次30min。用大孔吸附树脂对总黄酮粗提物进行了纯化处理,筛选了不同型号的树脂,考察了树脂的静态、动态吸附性能,并对上样液浓度、PH值和流速,洗脱溶剂浓度、体积等相关因素进行了优化,最终确立了款冬花总黄酮最佳的纯化工艺为:XAD16型大孔吸附树脂,上样液浓度为0.2g生药/ml,吸附流速为2ml/min,饱和吸附量是树脂:总黄酮=5:2,依次用蒸馏水洗至无还原糖反应,再用20BV生药40%乙醇以2ml/min的洗脱速度洗脱,收集40%乙醇部分,减压浓缩至干。在此工艺下得到的10批款冬花总黄酮纯度达56%以上。紫菀款冬花药对总黄酮最佳的纯化工艺为:XAD16型大孔吸附树脂,上样液浓度为0.2g生药/ml,吸附流速为2ml/min,依次用蒸馏水洗至无还原糖反应,再用20BY生药50%乙醇以2ml/min的洗脱速度洗脱,收集50%乙醇部分,减压浓缩至干。在此工艺下得到的药对总黄酮纯度达50%以上。 对紫菀总皂苷的提取纯化工艺进行了研究,采用四因素三水平的正交试验,最终确立了紫菀总皂苷最佳的提取工艺为:8倍量95%乙醇加热回流提取3次,每次1小时。用醇提水沉法结合大孔吸附树脂对总皂苷粗提物进行了纯化处理,确定了最佳醇提水沉料液比为1:2;筛选了不同型号的树脂,考察影响吸附量的各因素,确立了最佳的纯化工艺为:XAD1型大孔吸附树脂,上样液浓度为0.2g生药/ml,吸附流速为2ml/min,饱和吸附量是树脂:生药=1:2.6,依次用蒸馏水洗至无还原糖反应,再用22.5BY生药95%乙醇以2ml/min的洗脱速度洗脱,收集95%乙醇部分,减压浓缩至干,即得总皂苷部分。 对10批款冬花药材和相应的款冬花总黄酮富集物(中间体)、紫菀药材、紫菀款冬花药对进行了HPLC指纹图谱研究,通过色谱条件的优化建立了各自的指纹图谱检测方法,分别标定了个15、17个、21和18个共有峰,以控制药材的质量。参照国家药监局颁布的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》及运用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004年A版)对指纹图谱进行了评价,结果显示,相似度都在0.9～1.0之间。 比较了10份紫菀款冬花药对提取液各共有峰峰面积的大小,比较了不同比例紫菀款冬花配伍提取液各共有峰峰面积的变化。