猪肝细胞的分离培养和AMPK活性调控的研究

本试验在简化细胞培养方法的基础上，研究激活剂5-氨基-4-咪唑羧基酰氨核苷（AICAR）和抑制剂8-溴-腺甘一磷酸（Br8-AMP）对猪肝细胞AMPK活性的影响。猪肝细胞的分离采用二步胶原酶灌注法，细胞进行悬浮培养，简化之处是在培养过程不充氧气（95∶5）；AMPK活性研究采用单因素设计，设三个处理，分别为对照组、激活组和抑制组，在激活组和抑制组的培养液分别加入AICAR和Br8-AMP，浓度均为0.2mmol／1。测定30min、60min、180min细胞培养液中的谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）、尿素（BU）和细胞AMPK的活性。结果表明： 本试验采用的猪肝细胞分离方法，能分离得到较多的猪肝细胞，并保证细胞有较好的结构功能完整性，简化的培养操作能在180min内维持细胞较高的活性，可用于AMPK的研究； 在猪肝细胞培养液中分别加入0.2mmol／1的AICAR和Br8-AMP对仔猪肝细胞AMPK的活性有着不同程度的影响。猪肝细胞培养30min、60min，AICAR使仔猪肝细胞AMPK活性升高分别为8.11％、46.20％；Br8-AMP使AMPK的活性降低分别为9.13％、22.39％。 本试验表明：在体外研究中激活剂AICAR和抑制剂Br8-AMP可以有效的调节猪肝细胞AMPK的活性。