目的:研发一种在传统中医药理论指导下,疗效显著、安全可靠、工艺剂型先进、质量全面控制、延长患者的服药周期、减少服药次数、提高病人顺应性的中药新药制剂。通过正交试验设计方法优化两面针镇痛缓释片的提取工艺,对两面针中氯化两面针碱小肠吸收进行了评价,采用HPMC(K4M)作为基本骨架材料,加入微晶纤维素、乳糖,制备了日服两次,一次一片的两面针镇痛缓释片。制定了两面针提取物和两面针镇痛缓释片的质量标准,进行了初步稳定性研究,为其质量控制提供依据。
材料与方法:
1.材料:两面针:为芸香科花椒属植物两面针Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.的干燥根,购于安国药材有限公司。氯化两面针碱对照品购于中国药品生物制品检定所,批号:848-9901。
2.方法:（1）采用L9（3～4）正交试验设计优化提取工艺。以综合评分法来确定评价标准,采用直观分析和方差分析的方法,对正交试验结果进行分析。（2）采用单因素考察法,优化大孔吸附树脂纯化两面针总生物碱的重要参数,采用正交试验设计法,优化纯化条件,采用直观分析和方差分析的方法,对正交试验结果进行分析。（3）采用HPLC法测定氯化两面针碱,紫外分光光度法测定酚红含量,用酚红来标定在体循环液的体积,计算大鼠在体循环液中氯化两面针碱的含量。（4）采用L9（3～4）正交试验设计进行处方优化。以综合评分法确定评价标准,采用直观分析和方差分析的方法,对正交试验结果进行分析。（5）采用加速试验法和长期试验法,对两面针镇痛缓释片进行初步稳定性研究。（6）醋酸扭体法,对两面针提取物和两面针镇痛片的镇痛效果进行分析。
结果:
1.建立HPLC法测定两面针中氯化两面针碱的含量测定方法,单因素考察了提取时间、提取次数、提取溶剂、乙醇浓度及加酸对氯化两面针碱提取率的影响等提取条件,采用四因素三水平正交设计方法优化提取条件,确定最佳的提取工艺。
2.建立两面针中总生物碱的紫外分光光度法的含量测定方法,通过比较不同型号的树脂对两面针总生物碱的静态吸附.洗脱率,筛选出适合的树脂;通过考察树脂的动态吸附量、泄漏曲线、洗脱曲线等,确定出两面针总生物碱的最佳纯化工艺。
3.建立了氯化两面针碱的HPLC检测方法及酚红的小肠吸收紫外测定方法,对不同浓度的提取物在大鼠小肠段的吸收情况进行了考察,确定药物在体吸收方式,为被动扩散,为制备缓释制剂提供科学依据。
4.在单因素考察的基础上,确定润湿剂及颗粒干燥温度。建立体外释放度测定方法,选择释放介质,试验方法和试验转数,对不同规格的HPMC,HPMC的用量,填充剂的种类,润湿剂的用量,制片压力等条件进行考察,确定主要影响因素,并通过正交试验设计优化处方组成,对制剂工艺进行考察,确定最佳成型工艺。
5.对两面针镇痛缓释片质量标准进行研究,建立两面针提取物的制备方法及质量标准,建立了两面针镇痛缓释片的质量标准。
6.考察了两面针镇痛缓释片的初步稳定性,采用常温留样观察法和加速试验法,在1个月,2个月,3个月,6个月耿样,观察外观,检查释放度,测定重量差异及含量,为两面针镇痛缓释片的包装材料选择提供了科学依据。
7.通过醋酸扭体试验,对比了两面针提取物与两面针镇痛片的镇痛效果,结果镇痛效果相当,且随着剂量的增加镇痛作用增强。
结论:
1.确定本次试验的最佳提取工艺是:乙醇浓度为80%（加入0.1mol/L的盐酸溶液调pH值至3）,加醇量为8、6倍,提取两次,第一次提取2h,第二次提取1.5h。优选得到的工艺稳定可行,为两面针镇痛缓释片的制备提供可靠依据。
2.通过对九种不同型号的大孔吸附树脂进行筛选,确定HPD100型大孔吸附树脂对两面针生物碱类成分纯化效果最好,对两面针总生物碱的动态吸附量可达44.8mg/g;5BV的80%乙醇可将吸附在树脂上的生物碱洗脱下来,纯化物中总生物碱的纯度可达39%。
3.药物在小鼠体内的吸收情况与药物浓度相关性不大,由实验结果可知,低、中、高浓度的药物吸收百分率无显著差别,药物在大鼠体内的吸收是被动扩散,实验结果表明,大鼠小肠对氯化两面针碱的吸收情况良好,这一结果对药物剂型开发为缓释制剂提供了依据。
4.采用L9（3～4）正交试验设计进行处方优化。以综合评分法来确定评价标准,采用直观分析和方差分析的方法,对正交试验结果进行分析,确定了最佳处方。并对制剂制备工艺进行考察,最终确定了两面针镇痛缓释片的成型工艺,制备了日服两次,一日一次的两面针镇痛缓释片。确定两面针镇痛缓释片体外释放度在2h、6h、12h分别为20%～30%、50%～70%、90%以上。释药行为良好,基本达到释药完全。
5.本文只对三批样品进行了含量测定,取三批样品含量平均值下浮20%作为最低限量,对于确定药物含量,三批样品较少,且未做中试放大,只是对质量标准做了初步的研究。
6.本品在加速试验和常温条件下,外观性状、重量差异、含量指标及释放度无明显变化,表明本品基本稳定,在选择包装时,选择避免吸潮的材料且要密封保存。
7.扭体法是一种敏感、简便、重复性好的镇痛药筛选方法,用醋酸扭体法证明两面针提取物与两面针镇痛片对小鼠的镇痛作用相当,其作用随剂量的增加而增强。
