目的：观察坤宁安对围绝经期慢性应激刺激大鼠行为的影响,并探讨药物的作用机制。
方法：选用鼠龄为12-14个月的雌性SD大鼠,体重为280-350g,随机分为7组：正常围绝经期对照组(对照组)、抑郁模型组(模型组)、倍美力治疗组(倍美力组)、氟西汀治疗组(氟西汀组)、中药低剂量治疗组(中药低剂量组)、中药中剂量治疗组(中药中剂量组)、中药高剂量治疗组(中药高剂量组)。除对照组外均单笼饲养。本研究采用孤养结合慢性轻度不可预见性应激复合造模法,以氟西汀、倍美力作对照药物,并观察下列指标：①大鼠体重及行为学变化；②酶联免疫法测大鼠海马、下丘脑5-HT、NE,下丘脑CRH,血清中E2、CS含量；③大鼠海马和下丘脑组织形态学观察(HE染色)：④免疫组化法观察大鼠海马和下丘脑BDNF、bcl-2、bax、5HTR1A、5HTR2A表达；⑤RT-PCR方法检测海马、下丘脑5-HTR1A、5-HTR2A受体亚型mRNA表达。
结果：
1、坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠行为的影响
抑郁模型组大鼠与对照组相比,体重下降、蔗糖摄取量及糖水消耗百分比明显降低、水平运动和垂直运动得分降低(P<0.05)。坤宁安可不同程度减轻上述变化,对体重的影响,中药中、高剂量组、氟西汀组、倍美力组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖水消耗量比较,中药高剂量组与、氟西汀组、倍美力组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),但与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),中药中剂量组与倍美力组相比差异无统计学意义(P>0.05)。糖水偏爱百分比结果比较,中药高剂量组与氟西汀组及倍美力组比较,差异无统计学意义(P>0.05),氟西汀组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。中药高剂量组、倍美力组与对照组比较,有统计学意义(P<0.05)。在敞箱试验水平运动,中药高剂量组与氟西汀组及倍美力组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),与模型组、对照组相比均有统计学意义(P<0.05)。中药中剂量组、倍美力组相比差异无统计学意义(P>0.05)。在垂直运动中,中药高剂量组与氟西汀组及倍美力组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
2、坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠内分泌激素的影响
模型组大鼠与对照组大鼠相比下丘脑CRH、血清CS水平增高(P<0.05)；坤宁安可降低下丘脑CRH水平,中药高剂量组与氟西汀组、倍美力组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),但与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。中药中剂量组与中药高剂量组、倍美力组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。坤宁安可降低血清CS水平,中药中、高剂量组与氟西汀组、倍美力组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),但与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠血清E2水平较对照组下降(P<0.05),坤宁安可提高E2水平,中药低、中剂量组、氟西汀组E2水平与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。中药高剂量组与氟西汀组、倍美力组、对照组、模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。
3、坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠海马、下丘脑5-HT、NE含量的影响
抑郁模型组大鼠海马、下丘脑的5-HT、NE含量下降(P<0.05),坤宁安可提高抑郁模型5-HT的含量,在海马,中药中、高剂量组、倍美力组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),与氟西汀组、对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在下丘脑,中药高剂量组、氟西汀组、倍美力组、对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。坤宁安可提高抑郁模型NE的含量,在海马,中药高剂量组、倍美力组、氟西汀组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),但与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在下丘脑,中药高剂量组、倍美力组、氟西汀组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),其中,倍美力组与对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05),中药高剂量组、氟西汀组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。
4、坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠海马、下丘脑形态的影响
抑郁模型大鼠的海马区及下丘脑区神经元改变,胶质细胞增多,炎细胞浸润。各治疗组海马区、下丘脑病变较模型组均有不同程度改善,以氟西汀组、倍美力组、中药高剂量组改善程度较好。
5、坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠海马、下丘脑BDNF的表达的影响
抑郁模型组大鼠海马、下丘脑BDNF表达降低(P<0.05),坤宁安可增加大鼠海马、下丘脑的BDNF表达,中药高剂量组与氟西汀组相比差异无统计学意义(P>0.05),但与倍美力组、对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。
6、坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠海马、下丘脑Bcl-2、Bax表达的影响
抑郁模型组大鼠的Bcl-2、Bax阳性细胞表达增强,Bcl-2/Bax的数值与对照组相比明显下降(P<0.05),坤宁安可提高Bcl-2/Bax的比值,在海马,中药高剂量组与氟西汀组、倍美力组、对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在下丘脑,中药高剂量组和倍美力组、氟西汀组相比差异无统计学意义(P>0.05),与模型组、‘对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。
7、坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠海马、下丘脑5HTR1A、5HTR2A表达的影响
抑郁模型组大鼠海马区及下丘脑区5HTR1A阳性细胞与对照组性比阳性细胞表达减弱(P<0.05)。坤宁安可增加5HTR1A的表达,在海马区,中药高剂量组、氟西汀组、倍美力组相比差异无统计学意义(P>0.05)。在下丘脑区,中药高剂量组、氟西汀组、倍美力组相比差异无统计学意义(P>0.05),中药低、中剂量组与倍美力组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
抑郁模型组大鼠海马区5HTR2A阳性细胞与对照组性比较阳性细胞表达增强(P<0.05)。坤宁安能降低5HTR2A的表达,中药高剂量组与氟西汀组、倍美力组相比差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠下丘脑区5HTR2A阳性细胞表达组间差异相比无统计学意义(P>0.05)。
8、坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠海马、下丘脑5-HTR1A、5-HTR2A受体亚型mRNA表达的影响
抑郁模型组大鼠与对照组大鼠相比,海马、下丘脑的5-HTR1A受体亚型mRNA表达降低(P<0.05)；坤宁安可使大鼠5-HTR1A受体亚型mRNA表达上调。在海马,中药高剂量组作用强于倍美力组及氟西汀组(P<0.05),在下丘脑,倍美力组、氟西汀组与中药中剂量组相比差异无统计学意义(P>0.05),但与中药高剂量组相比差异有统计学意义(P<0.05),中药高剂量组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
抑郁模型组大鼠海马、下丘脑5-HTR2A受体亚型mRNA表达水平与对照组大鼠相比增高(P<0.05),坤宁安可使大鼠5-HTR2A受体亚型mRNA表达下调,在海马,中药高剂量组作用强于倍美力组及氟西汀组(P<0.05)。在下丘脑,中药高剂量组与对照组作用相比差异无统计学意义(P>0.05),与氟西汀组、倍美力组相比差异有统计学意义(P<0.05),中药低、中剂量组作用弱于氟西汀组、倍美力组(P<0.05)。
结论：坤宁安能改善围绝经期抑郁模型大鼠的行为,其机制可能是通过调整神经内分泌激素,大鼠海马、下丘脑单胺类神经递质含量、BDNF、Bcl-2、Bax、5HTR1A、5HTR2A的表达而起作用的。
