山麦冬总皂甙的分离及其对缺血性脑损伤保护作用的实验研究

目的: 临床脑血管疾病具有很高的发病率,死亡率和致残率,其中尤以脑缺血多见,严重威胁人类的生命安全和生活质量。目前,国内外尚无十分理想的治疗药物。本实验采用大孔树脂法分离山麦冬(Radix Liriopes)中山麦冬总皂甙(Total sapoins of Liriope Spicata lour,TSL),分光光度法进行含量测定,并对其在缺血性脑损伤中的保护作用及可能机制进行研究。 方法: 一.采用大孔树脂法提取并精制TSL水溶液,分光光度法测其含量。 二.利用三氯化铁局部涂抹损伤血管形成大鼠大脑中动脉(MCA)血栓方法制备大鼠局灶性脑缺血模型,观察不同剂量给药组对大鼠脑缺血4小时后行为学评分;脑梗塞面积;脑缺血梗塞周边区神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性表达细胞率;脑组织病理组织学变化的影响。 三.采用夹闭两侧颈总动脉再开放法制备小鼠全脑缺血再灌注损伤模型,观察不同剂量给药组对小鼠脑SOD活力的影响。 四.采用毛细管法及小鼠断尾法观察不同剂量给药组对小鼠凝血时间和出血时间的影响。 五.采用倍比稀释法做溶血试验,观察不同剂量对兔RBC影响。 结果: 一.利用大孔吸附树脂,在所选实验条件下,能有效分离TSL。制得TSL水溶液,含量为22.44mg/mL。标准曲线在0.004mg/ml-0.02mg/ml范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.47%。 二.TSL对大鼠局灶性脑缺血的影响: 1.行为学评分: (1)与模型组(6.50±1.58)相比:TSL11mg/Kg、44mg/Kg组及肝素组的行为学评分均显著降低(5.25±0.89 P﹤0.05;3.75±1.04 P﹤0.01 ;1.50±0.72 P﹤0.01)。 (2)TSL降低行为学评分有剂量相关性(P﹤0.05) 2.脑梗塞面积: (1)与模型组相比: TSL11mg/Kg及44mg/Kg组分别降低脑梗塞面积43.68%(P﹤0.01)和80.59%(P﹤0.01);阳性对照组(肝素组)能显著降低脑梗塞面积88.99%(P﹤0.01)。 (2)两TSL组间比较,有显著差异(P﹤0.01) 3.脑缺血梗塞周边区nNOS阳性表达细胞率: (1)与假手术组相比:模型组及给药组较假手术组nNOS阳性表达细胞率均明显增高(P﹤0.01)。 (2)与模型组相比:TSL11mg/Kg及44mg/Kg组分别降低nNOS阳性表达细胞率11.57%(P﹤0.01)和28.82%(P﹤0.01)。 (3)两TSL组间比较:差异显著(P﹤0.01)。 4.病理组织学变化: (1)与假手术组相比:模型组大体见额颞顶部颜色苍白,肿胀,并向对侧移位,脑表面静脉充血。切片HE染色镜下见神经细胞胞浆和胞核浓缩,深染,胞浆与核膜边界不清,核溶解或固缩,神经细胞外周间隙变宽,神经细胞固缩为三角形;梗塞灶主要分布于MCA供血区。 (2)与模型组相比:各给药组脑缺血损伤情况均有不同程度减轻。 三.TSL对小鼠全脑缺血再灌后SOD活力的影响 1.与假手术组相比:模型组及TSL给药组均显著降低SOD活力 (P﹤0.01); 2.与模型组相比:给药组与模型组间无显著差异(P>0.05);尼莫地平组可显著增加脑SOD活力(P﹤0.01)。 四.TSL对小鼠凝血时间和出血时间的影响 1.凝血时间 (1)与NS组相比:TSL22mg/Kg及66mg/Kg组延长小鼠凝血时间37.25%(P﹤0.05)和68.75%(P﹤0.01);肝素组显著延长凝血时间1878.12%(P﹤0.01)。 (2)两TSL组间比较有显著差异(P﹤0.05)。 2.出血时间 (1)与NS组相比:TSL22mg/Kg及66mg/Kg组延长小鼠出血时间42.19%(P﹤0.05)和73.84%(P﹤0.01);肝素组显著延长凝血时间161.18%(P﹤0.01)。 (2)两TSL组间比较差异显著(P﹤0.05)。 五.TSL对兔RBC影响 TSL对兔RBC无凝血及溶血作用。 结论: 用大孔树脂法分离TSL简便快速,分光光度法测其含量应用方便,准确。TSL水溶液静脉注射可降低大鼠局灶性血栓性脑缺血梗塞灶面积;改善神经功能障碍;抑制大鼠局灶性脑缺血梗塞周边区nNOS表达;可延长小鼠凝血时间和出血时间,无凝血及溶血作用。