骏枣多糖的提取纯化、结构分析及抗氧化活性研究

本文在前人研究的基础上对骏枣多糖进行进一步研究,首先对骏枣粗多糖进行纯化,分析纯化后多糖组分的结构,并利用化学发光法对骏枣粗多糖、纯化后两种多糖组分的体外抗氧化活性进行了比较研究,探究多糖糖醛酸含量与抗氧化活性的关系。主要内容与结论如下： 1.骏枣粉经过提取、脱蛋白、脱色处理得到骏枣粗多糖(CJP),先进行DEAE-Sepharose CL-6B离子交子柱层析粗分,得到5种多糖组分,分别为JuNP1、JuSP2、JuSP3、JuSP4、JuSP5,它们的回收率分别是1.9%、13.8%、10.7%、36.1%、13.2%, JuNP1是由水洗脱的中性多糖,其它四种是由不同浓度NaCl溶液洗脱的酸性多糖。根据回收率选择JuSP2、JuSP4进行Sepharose CL-6B凝胶柱层析,分别收集得率最高的组分,合并洗脱峰,透析冻干得到JuSP2b、JuSP4c。采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)和比旋光度法对这两种多糖组分进行纯度鉴定,同时用HPGPC法测定两种多糖组分的相对分子质量。JuSP2b、JuSP4c的相对分子质量分别为25575Da、14524Da。 2.通过紫外光谱、红外光谱、气相色谱、1H NMR等仪器手段分析JuSP2b、 JuSP4c的结构。紫外光谱结果表明JuSP2b含有少量的蛋白质,而JuSP4c不含蛋白质。红外光谱分析显示JuSP2b、JuSP4c均具有多糖物质的特征吸收峰,且JuSP4c在827.46cm-1、896.31cm-1均有吸收峰,说明它同时存在α-吡喃环、β-毗喃环结构。这与1H NMR的结果相一致。经过气相色谱分析,多糖JuSP2b是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的,其摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=0.23：2.38：0.51：0.39：0.91：3.29。多糖JuSP4c是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖组成的,其摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：半乳糖=2.34：9.56：0.85：2.21：2.71。高碘酸氧化-Smith降解反应显示,JuSP2、JuSP4c可能均存在(1→2)、(1→6)、(1→2,6)、(1→4)或(1→4,6)键型。Smith降解后JuSP2b的单糖残基是鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖,摩尔比为甘油：赤藓醇：鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：半乳糖=4.56:0.34:0.21:0.50:0.06:0.62:2.92; JuSP4c单糖残基是鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖,摩尔比为甘油：赤藓醇：鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖=2.02：0.31：0.45：0.43：0.21：0.49。 3.采用化学发光法研究粗多糖与两种纯化多糖的抗氧化性,通过研究三种多糖清除超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢的作用,得出半数抑制浓度IC50。结果显示三种体系抗氧化能力的大小顺序均为：粗多糖>JuSP4c>JuSP2b。粗多糖的抗氧化活性大于JuSP4c,可能是由于它含有色素等物质,与多糖发挥协同作用,增强抗氧化活性；JuSP4c的抗氧化活性大于JuSP2b,可能是与糖醛酸的含量有关。