转换生长因子β1（TGF-β1）抗大鼠椎间盘退行性变中细胞凋亡的研究

转换生长因子β1(TGF-β1)抗大鼠椎间盘退行性变中细胞凋亡的研究 目的 椎间盘退变疾病(disc degeneration disease，DDD)是一种发病率很高的疾病。目前认为椎间盘退变起源于髓核，细胞过度凋亡是髓核细胞退变的一个主要原因。而生长因子撤退是细胞凋亡的一个重要诱因。有研究表明通过注射TGF-β1对于退变的椎间盘细胞有阻止其退变的作用。本研究通过观察大鼠椎间盘退变模型在注射转换生长因子β1(TGF-β1)后，细胞凋亡的形态学变化及细胞凋亡率的变化，从基因水平探讨TGF-β1在阻逆椎间盘退行性变中的作用。 材料与方法 本实验选用雄性Wistar大鼠(中国医科大学实验动物中心提供)，均重300g，共48只。随机分为两部分：一部分不做任何处理，共12只，称为空白对照组；另一组制造椎间盘退变模型，共30只。造模后2周、未进行进一步试验前，这两部分分别随机选取3只大鼠处死。第二部分剩余27只大鼠再随机分为三个组：注射TGF-β1组、注射生理盐水对照组、非治疗组。每组共3只。此三组27只大鼠同空白对照组剩余9只大鼠，每组随机分为2周、4周、8周三个时间点。每个时间点n=3。分别处死后，每组大鼠同序列造模标记处取新鲜组织块。用苏木素伊红染色观察椎间盘凋亡细胞的形态，用TUNEL染色观察显色反应，并计数阳性细胞数表示细胞凋亡指数。 结果 1对普通光镜下的石蜡切片HE染色进行观察发现，造模2周后，造模的实验动物椎间盘内大量出现凋亡细胞，证实造模成功。而在注射TGF-β12周后，TGF组的椎间盘凋亡细胞开始减少，说明细胞已经开始修复。而与之对应，盐水组、非治疗组的凋亡细胞未见减少。4周、8周后，TGF组的凋亡细胞进一步减少，而盐水组和非治疗组的凋亡细胞依然未见减少。2用原位凋亡试剂盒对石蜡包埋标本进行检测，计算凋亡指数(apoptosis index，AI)。造模后2周，造模组AI同空白对照组AI相比差异显著(P＜0.01)，证明造模成功。注射TGF-β1后的每个时间点，TGF组同盐水组、非治疗组之间相比差异显著(P＜0.01)，均有统计学意义；盐水组同非治疗组之间相比无明显差异(P＞0.05)，无统计学意义；TGF组每时间点之间相比差异显著，(P＜0.01)，有统计学意义；而TGF组、盐水组、非治疗组同空白对照组之间相比差异亦显著(P＜0.01)，有统计学意义。 结论 1．本研究通过观察大鼠椎间盘退变模型在注射转换生长因子β1(TGF-β1)后，细胞凋亡的形态学变化及细胞凋亡率的变化，发现TGF-β1具有抗椎间盘退变细胞凋亡的作用。 2．TGF-β1不能完全使退变的椎间盘细胞的凋亡得到纠正。