化瘀祛痰法干预对食饵性动脉硬化家兔血清P选择素及PAI-1水平影响的实验研究

前言 动脉粥样硬化(AS)作为多种疾病的病理基础，一直是人们研究的重点。AS的发病机制是多因素的，不同学说的着眼点不同，但多相互渗透。现已证实：急性心血管事件的主要病理基础是冠状动脉内粥样硬化斑块的不稳定及次全阻塞性血栓的形成。病理学证实：冠状动脉内形成的血栓主要为血小板血栓。以上事实突显出血栓行成学说的重要性。P-选择素能较敏感的反映血小板在体内的活化情况。PAl-1是纤溶系统的主要生理抑制剂。血浆PAI-1水平升高已被列为冠心病的独立危险因素。本研究通过对食饵性动脉硬化家兔血清P-选择素、PAI-1和血脂水平变化的观察，探讨化瘀祛痰干预对血小板活化及纤溶系统的影响，进而探明其抗AS的机制。 实验材料 1 实验动物 新西兰兔。 2 主要试剂 血浆P选择素(PPS)试剂盒； 血清PAI-1试剂盒； 化瘀祛痰颗粒剂； 3 主要仪器 OLYMPUS型光学显微镜 JEM-1200EX型透射电子显微镜 AO石蜡超薄切片机 贝克曼700型全自动生化仪 分光光度计722S 实验方法 1 动物分组和饲养 健康雄性新西兰兔24只，2.0-2.5Kg，月龄3-4个月，随机分为3组 ①空白组(n=8)普通饲料喂养。同时于实验12周末至18周末，生理盐水10ml bid灌胃； ②模型组(n=8)高脂饲料喂养。同时于实验12周末至18周末，生理盐水10ml bid灌胃； ③治疗组(n=8)饲料同模型组，同时于实验12周末治疗性用药6周至18周末，予化瘀祛痰颗粒剂10ml bid灌胃； 每只兔每日总食量150 g，单笼饲养，饮水不限，第18周末处死。 2 血脂、血浆P-选择素、PAI-1测定 于实验12周末和实验18周末，分别取禁食12小时后，清晨8am兔耳 中央动脉血。酶法检测血脂; 3病理形态学检查 EL工SA法检测血浆P一选择素及血清PA工一1。 18周末处死动物，立即取出心脏和主动脉，按病理学常规方法处理标 本，分别在光学显微镜和透射电子显微镜下观察病理学改变。①标本用10% 福尔马林溶液浸泡固定、石蜡包埋、切片、HE染色，光学显微镜下观察和 照片。②切取部分主动脉弓组织，浸入2.5%戊二醛PBS缓冲液固定2小时 以上，PBS液清洗3次，再用10%饿酸固定1小时。经丙酮酸梯度脱水，环 氧树脂丙酮混合液浸泡24小时，纯石蜡包埋，超薄切片，铅铀双重染色， 透射电子显微镜下观察与照片。 4统计学处理 实验数据用万士s来表示，治疗前后组内对比用t检验、治疗后组间 对比用t检验，以上均在SPSS 10.0下进行。 实验结果 1治疗前后AS家兔血脂的比较 治疗前模型组、治疗组、与空白组相比较，总胆固醇(TC)、甘油三醋 (TG)、低密度醋蛋白升高(LDLC)(P(0.05)，高密度酷蛋白降低(HDLC) (P<0.05);化癖祛痰颗粒剂治疗6周后，与治疗前相比，治疗组TC、TG、 LDLC降低(P(0.05)，HDLC升高(P<0.05)。18周末治疗组与模型组比较也 得出相似结果。(P<0 .05) 2化癖祛痰颗粒剂对AS家兔血浆P一选择素、血清PA工一的影响 治疗前模型组、治疗组、与空白组相比较血浆P一选择素、PAI--1水平明 显升高(P<0 .01);化癖祛痰颗粒剂治疗6周后，治疗组血浆P一选择素、PAI一1 水平降低(P<0.01>。18周末治疗组与模型组比较也得出相似结果(P<0.05)。 3病理形态学改变 (1)大体观察 ，空白组主动脉管腔光滑完整。模型组局部形成纵行的线状病灶和灰黄 色的脂质斑块，表面光滑。治疗组整个主动脉内膜呈灰黄色或灰白色浑浊 外观，有点状病灶，较模型组病理改变减轻。 (2)一光学显微镜观察 空白组未见异常。模型组呈典型的AS改变。治疗组轻度AS改变与模 型组相比较其病理改变减轻。 (3)电镜观察 透射电子显微镜下空白组动物血管内皮细胞光滑完整，内弹力膜呈波 浪状。模型组内皮细胞间隙增宽，单核细胞附着，泡沫细胞向血管腔内移 动，内弹力膜呈撕裂状;平滑肌细胞内质网增多、扩张;线粒体增生、肿 胀，出现大量的脂滴。治疗组血管内皮细胞肿胀，有少量的泡沫细胞、单 核细胞;平滑肌细胞内质网轻度扩张、线粒体轻度增生，胞质内含有少量 的脂滴，与模型组相比较其病理改变减轻。 讨论 1中医学对AS病因病机的认识 中医没有AS的称谓，综合前人论述，中医对AS的认识可以综合为以 脏腑虚损，功能失调为本，以痰浊血癖为标，病位虽在血脉但属全身疾病。 本着中医防治原则，杨关林教授指出治疗AS应从气、血、痰、癖四个 字入手，认为治疗以通补兼施，在以通为主的基础上不忘内伤从脾胃论治 的学术思想，‘以祛痰化癖、益气健脾为法，拟化癖祛痰颗粒剂。 2痰与癖的关系 痰浊与血癖有着共同的病理特点又有着共同的来源及相似的致病特 征。其临床症状很多相似，难以截然分开。同时，痰与癖又多互为因果。 正因为痰癖有着如此紧密的联系，所以杨关林教授指出:治痰要活血，血 活则痰化，治癖要化痰，痰化则癖消。‘并指出要注意条理气机。 3痰与癖的现代研究 癖的研究比较深广。血癖证的现代研究主要有血液循环和微循环的障 碍、血栓形成、血液流变性异常等