长松萝活性成分的提取分离与活性测定

长松萝Usnea longissima Ach.隶属于子囊地衣纲茶渍目松萝科松萝属地衣植物,含有松萝酸,地弗地衣酸,巴而巴地衣酸,拉马酸,扁枝衣酸乙脂和地衣多糖等多种活性物质,具有极高的社会效益和经济价值。本论文首先以从秦岭,西藏,黑龙江小兴安岭和新疆阿尔泰山采集的数种松萝为试验材料,测定了95%乙醇提取物中松萝酸的含量,并测定了清除二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的能力。然后以西藏长松萝为试验材料,使用三氯甲烷进行提取,并对提取物进行纯品分离和纯品的鉴定。最后对长松萝的分离物进行总抗氧化能力和抑菌活性测试,并做了从长松萝中分离得到的纯品的最小抑菌浓度测试。研究结果表明: (1)以95%乙醇为溶剂在80℃进行两次重复提取,提取物在松萝酸的最大吸收波长284nm处测定吸光度。结果显示,长松萝中松萝酸含量最高,达到5.71%(黑龙江)和5.66%(西藏),是提取松萝酸的最佳原材料,对松萝酸的大规模开发利用有一定的参考价值; (2)以光度计比色法测定各松萝的95%乙醇提取物清除DPPH自由基能力,以IC50值作为评价试样清除DPPH自由基能力的指标,并将此应用于各松萝95%乙醇提取物清除DPPH自由基能力的测定,结果各松萝的95%乙醇提取物都有一定的清除DPPH自由基的能力,但是和抗坏血酸相比,清除能力都不强; (3)使用氯仿对西藏采集的长松萝在75℃进行索氏提取仪连续提取,总共从960g长松萝中提取到96g氯仿提取物。然后对氯仿提取物进行硅胶柱层析的梯度洗脱,并采用多种分离方法进行分离,共得到5种纯品。这5种纯品分别是2-甲基-4-乙氧基-6-甲氧基苯甲酸、巴尔巴地衣酸、松萝酸、2-甲基-4-甲氧基-6-羟基苯甲酸、化合物E。其中化合物2-甲基-4-乙氧基-6-甲氧基苯甲酸、2-甲基-4-甲氧基-6-羟基苯甲酸、化合物E为首次从长松萝中提取到。 (4)使用南京建成生物工程研究所提供的总抗氧化能力试剂测定盒对长松萝分离物(均为5mg/ml的丙酮溶液)的总抗氧化能力进行测试,测试结果除F6B外,其余都有一定的抗氧化能力,其中F8和F10的总抗氧化能力比抗坏血酸(77.70单位/每毫升样品溶液)还要强,最强的是F10,达到了86.21单位/每毫升样品溶液,说明F10具有很强的抗氧化能力,具有一定的应用价值。 (5)以滤纸片法对5mg/ml的各部分长松萝分离物丙酮溶液进行抗菌活性测定,大部分长松萝分离物对大肠杆菌和假丝酵母有一定的抑制作用,但抑菌能力弱于青霉素;所用提取物均没有抑制青霉的能力。 (6)在100,50,25,12.5,6.25,3.125微克/毫升六个浓度下对从长松萝中提取分离得到的5种化合物进行最小抑菌浓度测试。结果表明,在抑制大肠杆菌方面,5种化合物除化合物A以外,其余都有抑制大肠杆菌的活性,抗菌能力最强的是松萝酸,达到25微克/毫升;在抑制假丝酵母方面,只有化合物B和松萝酸有抑制能力,且松萝酸最强,达到12.5微克/毫升;在抑制青霉方面,5种化合物均没有表现出抑菌能力。