上海地区儿童腹泻轮状病毒感染的临床流行病学研究

A组轮状病毒(RV)是婴幼儿腹泻最重要的致病原，发展中国家每年约有60-87万名儿童死于重型轮状病毒腹泻，虽然在发达国家轮状病毒感染很少引起死亡，但高发病率造成很大的经济损失。鉴于轮状病毒感染广泛，几乎5岁以下儿童都经历至少一次轮状病毒腹泻，改善公共卫生条件不能有效地控制轮状病毒腹泻及感染的流行，而且治疗缺乏特效药，WHO将轮状病毒疫苗列入优先发展的位置。了解世界各地有关轮状病毒腹泻病的流行病学资料对于制定该病的预防措施非常必要。研制中的轮状病毒疫苗有望减轻轮状病毒腹泻病造成的疾病负担以及危害，首先研制成功的口服减毒活疫苗主要预防由G1-G4型轮状病毒株引起的腹泻病，具良好的保护效果。疫苗在各地区的引进与使用要求评估当地轮状病毒腹泻病的流行情况以及监测流行株的变化规律，本项研究就上海地区儿童轮状病毒腹泻病的流行病学现状作报道，为国内轮状病毒腹泻病的防治提供科学依据。 本课题从四个方面进行研究： 一．上海地区儿童腹泻轮状病毒病感染状况的研究 收集我院1999年11月1日～2001年12年31日因患腹泻病住院的社区感染儿童以及住院期间患腹泻病的院内感染儿童的粪便标本共1230份(每人1份)，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)检测轮状病毒RNA，493份A组轮状病毒RNA阳性，阳性检出率为40.1％，未发现B组及C组轮状病毒。在493份轮状病毒RNA阳性的标本中，RNA长型有397份(80.5％)，RNA短型有55份(11.2％)，混合型有18份(3.7％)，RNA部分降解未能分型有23份(4.7％)，基因组以长型为主。对471份有明确编号的轮状病毒阳性标本来源的患儿分析显示，A组轮状病毒是上海地区5岁以下住院儿童腹泻病的主要病原，3月龄至2岁婴幼儿是轮状病毒的易感人群，平均发病年龄14.2月，三年冬季11月份与12月份轮状病毒阳性检出率均达到50％以上，冬季为流行高峰。 二．上海地区A组轮状病毒G血清型分布的研究 将队GE检测轮状病毒阳性的粪便标本重新用Trizol抽提，328份含有足量 RNA的标本进一步行RT一PCR扩增VP7全基因，共有254份标本(77.4%)获 得阳性产物cDNAS，将cDNAS与Gl一G4型特异探针进行杂交分型试验，结果 显示:Gl血清型占第一位141例(55.5%)，G3血清型占第二位70例(27.6%)，GZ 血清型占第三位24例(9.4%)，混合感染血清型占第四位16例(6.3%)，G4很少见 仅发现1例(0.4%)，未分型2例(0 .8%)，Gl一G3占分型株的98.8%。所有GZ型均 为电泳短型，而Gl、G3、G4均为电泳长型。轮状病毒的发病年龄与临床症状 的严重程度与不同G血清型无关。 三.轮状病毒合并人类杯状病毒感染的研究 493份轮状病毒阳性的标本用Trizol抽提后，采用RT一PCR法检测杯状病毒， 有9份标本同时合并感染杯状病毒，混合感染率为1 .8%。9例混合感染者散发在 2000年12月至2001年10月，5例来自社区感染，4例来自院内感染，患儿年 龄最小仅15月，最大11个月，其中4例有发热，持续1一5天，发热高峰382- 39.5oC，9例均有腹泻，持续2一巧天，24小时腹泻最多次数2一20次，2例有呕 吐，持续1一5天，2例发生轻度脱水，分别发生在10月龄与11月龄患儿。儿童 腹泻病病原的复杂性不容忽视，杯状病毒作为儿童社区及院内感染腹泻病的病因 应给予重视。 四.用于检测粪便标本中A组轮状病毒的两种方法的比较 1 023份标本中有893份标本1一3天内采集后用ELISA法检测A组轮状病 毒，其中ELISA法检出阳性标本454份，阳性率为50.8%，再行PAGE法检测， 阳性标本446份，阳性率为49.9%，二者阳性率相近，无显著性差异。两种方法 检测标本均阳性者为356份，均阴性者为349份，与PAGE法相比，ELISA法 的准确率为78.9%，敏感度为79.8%，特异度为78.1%。PAGE法显示RNA条带 的深浅在ELISA法阳性组与阴性组之间的构成比有统计学差异，ELISA法用于 检测轮状病毒含量少的粪便标本不够敏感，易出现假阴性反应，而且该法也可出 现假阳性反应，对其诊断轮状病毒的准确性有一定影响。ELISA法与PAGE法 的不一致率在各年龄组比较无显著差异，二者一致与否与年龄无关。ELISA法具 有简便、快速、敏感的优点，尤其适用于临床大量标本的检测，队GE法虽然较 繁锁，但病毒RNA有其特殊的十一条条带，更加直观准确，甚为可靠。