实验目的本实验旨在通过研究湿阻中焦证胃水通道蛋白异常表达以及平胃散对其调控机制的研究,为平胃散调控体内水液电解质等的代谢开辟一条新的途径,从而使得平胃散对机体影响机制的研究有了更加系统、更加深彻、更加全面的概括。
实验方法采用黄秀深等的综合造模方法进行造模。通过免疫组化方法测定AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、AQP5、AQP7、AQP9在胃的分布表达情况来了解造模及给药后水电解质代谢产生差异的机制的情况。通过测定血清中AVP、VIP、的含量来了解大鼠体内水电解质代谢变化的情况。通过测定胃组织和粘膜中AQP1、AQP9、VIP、cAMP、AC、PKA、PKC、PI3K的含量的改变来说明造模以及给药后大鼠体内激素水平的变化和调节细胞水电解质进出的各种通道蛋白和相关的信号转导途径的信号分子的变化。从而来了解平胃散对湿阻中焦证模型的作用机制的情况。
实验结果
1七个水通道蛋白在胃的分布
1.1水通道蛋白在责门的分布
1.1.1AQP1正常大鼠AQP1主要分布于责门的粘膜层。经造模后,其在贲门粘膜的表达有所增加；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组没有明显的差异,但是平胃散组的表达与自然恢复组相比,显著降低。
1.1.2AQP2正常大鼠AQP2主要分布于贲门的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组没有多大的差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组没有多大的差异,平胃散组的表达跟自然恢复组也在同一水平。
1.1.3AQP3正常大鼠AQP3主要分布于贲门的粘膜层。经造模后,模型组的表达比空白组有所增加；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组没有明显的区别,平胃散组的表达与自然恢复组相比,有所下降。
1.1.4AQP4正常大鼠AQP4主要分布于贲门的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组没有多大的差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组没有明显的差异,平胃散组的表达比自然恢复组有所降低。
1.1.5AQP5正常大鼠AQP5主要分布于贲门的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组没有多大的改变；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组没有明显的差异,平胃散组的表达与自然恢复组没有明显的差异,但是空白给药组的表达与空白相比,有所上升。
1.1.6AQP7正常大鼠AQP7主要分布于责门的粘膜层。经造模后,模型组的表达比空白组显著增加；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组相比,没有多大的改变,平胃散组与自然恢复组相比,也在同一水平。
1.1.7AQP9正常大鼠AQP7主要分布于责门的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组相比,有所下降；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达和模型组没有差异,平胃散组的表达较自然恢复组升高。
1.2水通道蛋白在胃体中部的分布
1.2.1AQP1正常大鼠AQP1主要分布于胃体中部的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组相比,没有差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组相比,没有多大的差异,平胃散组的表达与自然恢复组相比,有所降低。
1.2.2AQP2正常大鼠AQP2主要分布于胃体中部的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组相比,显著下降；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达在模型组的基础上仍有继续降低,甚至基本不表达,平胃散组的表达与自然恢复组比较,显著升高,值得一提的是,空白给药组AQP2的表达较空白组显著增加。
1.2.3AQP3正常大鼠AQP3主要分布于胃体中部的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组相比,没有差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组和平胃散组AQP3的表达亦没有任何改变。
1.2.4AQP4正常大鼠AQP4主要分布于胃体中部的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组相比,没有差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组相比,没有多大的差异,平胃散组的表达与自然恢复组相比,差异均不大。
1.2.5 AQP5正常大鼠AQP5主要分布于胃体中部的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组没有多大的差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组和平胃散组的表达均没有多大的改变。
1.2.6 AQP7正常大鼠AQP7主要分布于胃体中部的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白没有多大的差异；经过三天的自然恢复和给药后,模型组的表达与自然恢复组没有差异,平胃散组的表达与自然恢复组也没有多大的差异,基本是在同一水平。
1.2.7AQP9正常大鼠AQP7主要分布于胃体中部的粘膜层。经造模后,模型组的表达与空白组相比没有多大的差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的表达与模型组没有明显的差异,但是平胃散组的表达与自然恢复组比较,显著增加。
2水通道蛋白调节机制中相关因素的测定
2.1长时调节机制的测定
2.1.1 AQP1和AQP9在胃的含量的测定
2.1.1.1AQP1在贲门粘膜下组织中,模型组AQP1的含量与空白组相比,有所下降；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组中AQP1的含量与模型组相比,仍在继续下降,平胃散组AQP1的含量与自然恢复在相比,有所增加,但是没有统计学意义。
在胃体中部粘膜中,模型组AQP1的含量与空白组相比,没有多大的差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组中AQP1的含量与模型组相比,有所下降,平胃散组AQP1的含量与自然恢复组相比,显著增加,空白给药组与空白组相比,AQP1的含量有所增加。
2.1.1.2AQP9在胃体中部粘膜下组织中,模型组中AQP9的含量与空白组相比,没有差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组中AQP9的含量与模型组相比,差异不大,平胃散组与自然恢复组相比,差异也不大,空白给药组中AQP9的含量与空白组相比,有所上升,且是五个组中含量最高的。
在胃体中部粘膜中,模型组AQP9的含量与空白组相比,显著下降；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组的含量与模型组比较,仍在继续下降,平胃散组的含量与自然恢复组相比,显著上升。
2.1.2激素调节机制的测定
2.1.2.1血清VIP模型组中VIP的含量与空白组相比,下降不多,差异不明显；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组在模型组的基础上,仍在继续下降,平胃散组VIP的含量高于自然恢复组,但没有统计学意义。
2.1.2.2血清AVP模型组AVP的含量与空白组比较,有所降低,经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组AVP的含量和平胃散组中AVP的含量都在继续下降,但两组之间没有差异。
2.1.2.3胃中VIP在胃体中部组织中,模型组VIP的含量与空白组比较,有所降低；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组中VIP的含量与模型组相比有所升高,平胃散组中VIP的含量与自然恢复组,有所上升,空白给药组与空白组相比较,含量增加。
2.2短时调节机制的测定
2.2.1胃中VIP激素调节机制的测定
2.2.1.1cAMP在胃体中部粘膜下组织中,模型组cAMP的含量与空白组相比,有一定程度的降低；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组cAMP的含量与模型组相比,有所上升,平胃散组与自然恢复组比较,没有差异,空白给药组较空白组中cAMP的含量有所增加。
在胃体中部粘膜中,模型组cAMP的含量与空白组相比,有一定程度的降低,但是没有统计学意义：经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组cAMP的含量在模型组的基础上,仍在继续下降,平胃散组与自然恢复组比较,有所上升,但差异不大,空白给药组中cAMP的含量与空白组相比,有所上升。
2.2.1.2AC在胃体中部粘膜下组织中,模型组AC的含量与空白组相比,有一定程度的降低；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组AC的含量与模型组相比,有所上升,平胃散组与自然恢复组相比,有所上升,空白给药组与空白组相比,AC的含量增加显著。
在胃体中部粘膜中,模型组AC的含量与空白组相比,没有差异；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组AC的含量与模型组相比,有所下降,平胃散组与自然恢复组相比,有所上升,空白给药组与空白组相比,AC的含量增加。
2.2.1.3PKA在胃体中部粘膜下组织中,模型组PKA的含量与空白组比较,有所下降；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组PKA的含量与模型组相比,有所上升,平胃散组与自然恢复组相比,有所上升。
在胃体中部粘膜中,模型组PKA的含量与空白组相比,差异不大；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组PKA的含量与模型组相比,下降幅度较大,但无统计学意义,平胃散组与自然恢复组相比,有所上升。
2.2.1.4PKC在胃体中部粘膜下组织中,模型组PKC的含量与空白组比较,有所下降；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组PKC的含量与模型组相比,有所上升,平胃散组与自然恢复组相比,差异不大,空白给药组与空白组相比,PKC的含量增加。
在胃体中部粘膜中,模型组PKC的含量与空白组相比,有所下降；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组PKC的含量与模型组相比,仍在继续下降,平胃散组与自然恢复组相比,差异不大。
2.2.1.5PI3K在胃体中部粘膜下组织中,模型组PI3K的含量与空白组比较,有所下降；经过三天的自然恢复和给药后,自然恢复组PI3K的含量与模型组相比,差异不大,平胃散组与自然恢复组相比,PI3K的含量有所增加,空白给药组与空白组相比,PI3K的含量增加。
实验结论湿阻中焦证模型造模和给药后,不仅影响到胃中水通道蛋白的分布的改变,而且还引起了胃中水通道蛋白的含量的变化,最主要是引起胃粘膜层水通道蛋白分布以及含量的改变。说明这种模型以及平胃散通过调节胃水通道蛋白的含量和分布变化来改变大鼠机体内水、电解质的代谢。围绕水通道蛋白的激素如AVP、VIP和信号转导途径中的各种信号分子如cAMP、AC、PKA、PKC、PI3K也发生了相应的改变。说明平胃散对大鼠体内水电解质的影响是通过水通道蛋白以及这些激素和信号分子的作用机制来达成的。
