金钱草为报春花科珍珠菜属植物过路黄(Lysimachia christinae Hance)的干燥全草,是传统的清肝利胆药,或单方或组方,被广泛用于肝胆结石和泌尿系结石的治疗。金钱草的临床应用除了采用传统水煎剂外,还有多种金钱草单方制剂和以金钱草为主药的复方制剂在国内药品市场流通,其中以金钱草颗粒剂最为常见。传统的金钱草颗粒含有大量的糖,以满足制粒工艺和调节口味的需要。但随着糖尿病和肥胖症等疾病的发病率升高,大量患者期待无糖金钱草颗粒的问世。所以,重庆和平制药有限公司拟开发无糖金钱草颗粒,委托本课题组制定无糖金钱草颗粒的质量标准。
本文首先从原料药材金钱草中分离特有的化学成分作为对照品,从金钱草乙醇提取物的正丁醇萃取部分中分离得到3个黄酮类化合物,分别鉴定它们的结构为：槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-半乳糖苷(1)、杨梅素-3,3’-二-O--α-L-鼠李糖苷(2)、槲皮素-3,3’-二-O-α-L-鼠李糖苷(3)。以槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-半乳糖苷为对照品,建立了测定无糖金钱草颗粒中该化合物含量的高效液相色谱(HPLC)法；并对该方法进行了方法学评价。确定样品溶液制备方法为用30倍于样品量的甲醇,室温下超声提取样品30min,取15倍于样品量的续滤液减压蒸干,残留物用1倍于样品量的甲醇溶解。色谱条件为：phenomenex C18色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm)；洗脱溶剂：乙腈-0.5%冰醋酸(A),0.5%冰醋酸水溶液(B)；洗脱程序：0～25 min,15%A；25～25.05 min,15%A→100%A；25.05～30 min,100%A;30～30.05 min,100%A→15%A；30.05～40 min 15%A；流速：1.0 mL·min-1；柱温：35℃；检测波长：255 nm。方法学考察证明,用该法测定无糖金钱草颗粒中槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-半乳糖苷的含量,在0.2μg～20μg范围内线性关系良好,日内及日间精密度良好,对照品溶液和样品溶液在5天内稳定,加样回收率在95%左右。本文还建立了无糖金钱草颗粒总黄酮的含量测定方法。样品溶液制备方法为用10倍于样品量的甲醇,室温下超声提取30 min,过滤,取续滤液。以芦丁为对照品,用A1C13-甲醇溶液为显色剂,采用分光光度法,在410 nm测定样品溶液显色后的吸光度。对该方法进行方法学考察,证明该法在0.012 mg·mL-1～0.040 mg·mL-1范围内线性关系良好,日内及日间精密度良好,对照品溶液和样品溶液在4天内稳定,加样回收率为96.63%-97.59%,表明用该法测定无糖金钱草颗粒中总黄酮含量可行、可信。
本文建立了无糖金钱草颗粒的HPLC指纹图谱测定方法。确定样品溶液制备方法为用10倍于样品量的甲醇,超声提取30min后过滤,取3倍于样品量的续滤液,减压蒸干,残留物用1/5倍于样品量的甲醇溶解。优化了HPLC条件,使色谱图呈现尽量多的峰并使主要色谱峰基本达到基线分离,确定HPLC方法为选用phenomenex C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),乙腈-0.5%冰醋酸(A)-0.5%冰醋酸水溶液(B)梯度洗脱,梯度程序：0～10 mmin,5%A；10～10.5 mmin,5%A→10%A；10.5～30 min 10%A→15%A；30～50 min 15%A→18%A；50～60min 18%A→20%A；60～60.5 mmin,20%A→100%A；60.5～70 min,100%A。流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长255 nm。应用国家药典委员会2004年颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”比较分析了6个无糖金钱草颗粒样品的指纹图谱,建立了无糖金钱草颗粒的标准指纹图谱,包括了19个色谱峰。
本文建立的无糖金钱草颗粒中槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基-(1→2)-p-D-半乳糖苷的HPLC含量测定法、总黄酮含量测定法、指纹图谱测定法均具有良好的重复性,且操作简单,可用于无糖金钱草颗粒的常规质量控制。
本文还对无糖金钱草颗粒进行了一般理化鉴别,测定了6批无糖金钱草颗粒样品的一系列指标,包括粒度、堆密度(包括松密度和紧密度)、干燥失重、水不溶物含量、炽灼残渣、重金属含量,证明了重庆和平制药有限公司试制的无糖金钱草颗粒符合国家药品食品监督管理局的要求。
